神经组织染包括三部分:基本染,中枢神经系统染和周围神经系统染。
基本染如HE染,胶原纤维的VG,Masson三染;弹力纤维的Wei gret氏染;网状纤维的W氏染;以及细菌,脂类等等。
中枢神经系统特殊染包括神经细胞,神经纤维,髓鞘,神经胶质细胞及纤维的染。
周围神经系统的特殊染包括周围神经髓鞘,轴索及末捎的染。
神经组织的特殊染,大多为银浸润法,组织要求以甲醛液固定。有的如变性髓鞘,尼氏小体等的显示,则须特殊的固定液固定,否则得不出正确的结果。同时,由于神经组织及易收缩,脱水时应从低浓度的脱水剂开始。
神经组织的特殊染所用各种试剂要求化学纯,试剂用量要准确,临用时新鲜配制。配制试剂的蒸馏水以双蒸水为佳,所盛试剂的容器以清洁有玻璃瓶;避免用金属器械或手接触试剂 3.1.尼氏小体染
3.1.1.甲苯胺兰或琉菫染法
[固定]
[试剂]
(或01-05%琉堇水溶液)
分化液:
苯胺 10ml
95%酒精 90ml或:木榴油 5ml
玉树油 40ml
二甲苯 50ml
纯酒精 15ml
(用时以等量纯酒精稀释)
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.1%甲苯胺兰—硼砂液于56℃温箱内30分钟;或酒精灯火焰上加温至染液冒气,待冷却后再加温反复三次,约5分钟,蒸馏水洗。
3.分化液分化(95%酒精分化):至基质呈浅蓝或近无,尼氏小体清晰可见(镜下控制)。
4.纯酒精脱水,透明,封固。
[结果]
尼氏小体呈蓝或紫;细胞核呈蓝;基质无。
[应用]
用于神经损伤,白喉,婴儿麻痹症等传染病时,其尼氏小体的数量减少,位置改变甚至溶解,消失。
[注意事项]
超过24小时后的尸体检材,尼氏小体常常消失,变形,再证示其则极不准确。尼氏小体为粗细不等的颗粒集合成多角或长形之小体,位于神经细胞质内。易被甲苯胺兰,琉堇及焦油紫等染料所染,但被染切片易褪,不易长期保存。由其是焦油紫有感光作用,以染的切片通过强光则很快褪。
3.1.2.焦油紫(克紫)染法
[固定]
10%甲醛固定液,石蜡切片8~10μm。
[试剂]
焦油紫水溶液:
1%焦紫油水溶液 5ml
冰醋酸溶液 1dip
蒸馏水 95ml
分化液:
****溶液 10ml
纯酒精溶液 10ml
氯仿溶液 10ml
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至蒸馏水,火棉胶切片直接入70%酒精溶液。
2.焦油紫溶液37℃温箱内染6~24小时。
3.蒸馏水速洗。
4.分化液(或95%酒精)分化,镜下控制;
5.纯酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
[结果]
尼氏小体呈深紫;细胞核呈淡紫;背景呈洁白或微黄。
3.1.3.棓花青-铬矾改良染法
[固定]
10%甲醛固定液等。石蜡(冰冻)切片10~20μm。
[试剂]
棓花青-铬矾染液:
棓花青 0.6g
蒸馏水 20ml
5%铬矾水溶液 200ml
1%盐酸溶液
配制:棓花青以蒸馏水溶解过滤,将滤纸及滤渣放入5%铬矾溶液中,水浴煮沸30分钟,冷却,过滤,用盐酸调pH1.6。pH1.6蒸馏水
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至pH1.6蒸馏水。
(冰冻切片须经70%酒精脱脂)
2.棓花青-铬矾液中室温染24小时。
3.用蒸馏水洗。
4.常规脱水,透明,封固。
[结果]
尼氏小体呈灰蓝。
3.1.
4.Pichinge r氏美兰法
[固定]
新鲜组织固定于95%酒精溶液;石蜡包埋。
[试剂]
pH4.6醋酸美兰液:
1mol/L醋酸 1ml
1mol/L醋酸钠 1ml
美兰 0.064g
蒸馏水 100ml
4%钼酸铵水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.pH4.6醋酸美兰液染10分钟。
3.醋酸缓冲液分化。
4.4%钼酸铵水溶液固定染数分钟。
5.蒸馏水洗涤。
6.脱水、透明、封固。
[结果]
尼氏小体呈鲜蓝(比Nissl氏简单可靠,由于钼酸钠的固定作用不易褪。
3.1.5.混合染法
[固定]
新鲜组织固定于20%甲醛溶液;石蜡包埋。
[试剂]
混合液:
焦油紫 0.01g
亚甲蓝 0.01g
甲苯胺蓝 0.01g
蒸馏水 100ml
95%酒精溶液;
0.5%曙红酒精溶液;
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2.混合液室温染24小时。
3.蒸馏水洗涤。
4.95%酒精溶液分化(镜下控制尼氏小体清晰为止)。
5.0.5%曙红酒精溶液10~20秒钟。
6.脱水、透明、封固。
[结果]
尼氏小体呈紫蓝;背景呈红。
3.2.神经内分泌物质
3.2.1.Gomoei氏铬矾苏木精染法
[固定]
10%甲醛水溶液等。
[试剂]
媒染液:
饱和水溶液 75ml
甲醛溶液 25ml
冰醋酸液 5ml
硫酸钾铬 4g
(混合加温50℃溶解)
氧化液:
2.5%过锰酸钾水溶液 10ml
5%硫酸水溶液 10ml
蒸馏水 60ml
1%草酸水溶液
Gomori氏铬矾苏木精液
0.5%盐酸酒精液
0.25%焰红水溶液
5%磷钨酸水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.媒染液内48-72小时(置37℃温箱)。
3.自来水洗至切片无。
4.氧化液内5分钟,蒸馏水洗;
5.1%草酸水溶液3分钟,自来水洗10分钟,蒸馏水洗。6.Gomori氏铬矾苏木精液4℃染30-40分钟。
7.0.5%盐酸酒精分化30钟,水洗2分钟。
8.0.25%焰红水溶液2分钟。
9.5%磷钨酸水溶液1-2分钟,水洗5分钟。
10.90%酒精溶液分化焰红着。
11.常规脱水,透明,封固。
[结果]
.3.神经原纤维扣结及老年斑
3.3.1.Von Braun muli氏染法
[固定]
新鲜组织冰冻切片10—30μm。
[试剂]
20%硝酸银水溶液
10%甲醛水溶液(自来水配制)
0.2%氯化金水溶液
5%次亚硫酸钠水溶液
[操作步骤]
1.冰冻切片蒸馏水洗。
2.20%硝酸银水溶液60℃温箱内30分钟。
3.入20滴浓氨水/50ml蒸馏水中片刻,蒸馏水洗。4.10%甲醛水溶液还原,至切片呈灰,蒸馏水洗。5.0.2%氯化金水溶液3分钟,蒸馏水洗。
6.5%次亚硫酸钠是溶液固定3分钟。
7.蒸馏水洗,附贴于涂有明胶的玻片上吸干。
8.常规脱水,透明,封固。
[结果]
神经原纤维,黑老年斑呈黑。
3.4.神经(原)纤维及末梢染
3.4.1. Holme氏神经纤维显示法
[固定]
10%甲醛水溶液等。石蜡切片20微米厚。
[试剂]
20%硝酸银水溶液
浸润液:
pH8.4硼酸—硼砂缓冲液 100ml
1%硝酸银水溶液 1ml
10%吡啶水溶液 5ml
蒸馏水 394ml
还原液:
对苯二酚 1g
亚硫酸钠 10g
蒸馏水 100ml
0.2%氯化金水溶液
2%草酸水溶液
5%次亚硫酸钠水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2.20%硝酸银水溶液于暗处室温过夜,蒸馏水洗3次。
3.浸润液内37℃温箱12—24小时。
4.还原液(水温加至25℃)2分钟。
5.自来水洗3分钟,移入蒸馏水中至纤维明显出现。
6.0.2%氯化金水溶液3分钟(或至切片的棕清除为止)。7.蒸馏水稍洗一次。
8.2%草酸水溶液至轴索呈黑蓝为宜(镜下控制),蒸馏水洗。9.5%次亚硫酸钠是溶液固定5分钟,水洗。
10.常规脱水,透明,封固。
[结果]
神经纤维呈黑,背景呈浅灰紫。
3.4.2.Glee-Mars land氏银浸润法
[固定]
10—20%中性甲醛水溶液;石蜡切片8—10μm。
[试剂]
20%硝酸银水溶液
10%甲醛水溶液(自来水配制)
氨银液:
20%硝酸银水溶液 30ml