摘要 目的 规范流式细胞术检测淋巴细胞亚的操作，保证检测结果准确性，对检测过程中出现的常见问题及注意事项进行汇总，提出解决方案。
方法 对本科室使用贝克曼FC500流式细胞仪检测淋巴细胞亚的检测过程中出现的各种问题进行汇总、整理和分析，提出解决方法。结果 流式细胞术检测淋巴细胞亚中的常见问题包括前处理中遇到的的问题、实验操作过程中遇到的问题和分析过程遇到的问题等。采用控制实验环境条件、多步骤多次核对标本信息、严格规范操作等方法可解决检测中存在的上述问题。讨论 淋巴细胞亚是常见检测项目之一，实验过程中容易出现各种问题，只有发现、解决和预防这些问题，才能保证检测结果的准确性和可靠性。 关键词：淋巴细胞亚 流式细胞仪
一、淋巴细胞亚
淋巴细胞是构成人体免疫系统的主要细胞，主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞，三种亚的分布比例及数量具有重要的临床意义。检测淋巴细胞亚的方法有很多种，目
前比较常用的是流式细胞术。
二、流式细胞术
流式细胞术是用荧光素（如CD3，CD4，CD19等）标记细胞，经过与细胞上的抗原反应，经过流式细胞仪检测，通过对细胞荧光素表达情况，分析标本中的淋巴细胞及淋巴细胞亚的比例和数量。
三、检测过程中遇到的问题
1.分析前
1.1 标本前处理
1.1.1 实验前应核对标本的信息一致性，确认实验项目。对标本进行排序和编号，T和NKB需分开编管，并做好标记。
1.2 实验操作
1.2.1 加抗体时应核对抗体是否无误，避免加错抗体；每加一次抗体需更换头，避免污染试剂瓶中的抗体；检查抗体量，以防多加或漏加。
1.2.2 加标本前，应观察标本状态，是否存在凝集、黄疸、溶血等，加样时，再次核查试验号和项目，充分混匀标本，加样时避免头碰试管壁，如管壁沾有血迹，用干净棉签拭去；做绝对计数时，为保证结果准确性，采用反向加样。
1.2.3 溶血时应严格按量按时溶血，若溶血效果不好，可以适当延长溶血时间。淋巴细胞亚绝对计数，在溶血结束后应及时加入盐水、计数微球并上机检测
1.2.4 由于抗体属于荧光试剂，在强光照射下会淬灭，因此在全流程中应避免光照，一旦完成必要操作，应立即放到避光处；同时，荧光抗体也惧怕高温，试剂需要保存在冰箱冷藏中，同理，实验中标本也应放置在阴凉处，避免高温。
1.3 上机检测过程
1.3.1 上机检测时，应再次核对标本的试验号、条码号及试验项目；完成检测时，将试管取下时也应当再次核对试验号；同时，检测时流速不能过快。
2. 结果分析
2.1 45/SSC散点图 45/ss散点图会出现界线不明显的情况，淋巴细胞和单核细胞、CD45dim区域区分不开，导致不能准确设门圈出淋巴细胞，影响淋巴细胞亚的百分比和绝对计数的结果。
2.2 CD3/SSC的散点图 CD3-和CD3+的细胞界线不明显，两细胞中有很多处于dim区域的细胞，导致不能很好地区别出CD3的阴阳性，影响T细胞和非T细胞的划分。
2.3 十字门划分 如CD3/CD4，CD3/CD8等散点图需要使用十字门划分出目的细胞的比例及绝对计数，但是经常存在的散在的点影响操作者对结果的判读。
2.4 细胞无法分 经常在分析时发现部分标本的细胞只有一或一团细胞，无明显界线，如CD16+/CD56+的细胞，但是同时CD19+可以区分出两细胞。这时可以采用反向设门的方法，圈出CD19+的细胞，看其CD16/CD56的表达情况，然后调节十字门的位置若能区分出两细胞，可使用十字门划分开；若CD19+和CD19-的细胞均匀分散的CD3-CD16/CD56的图上分布，可以考虑排除是否存在漏加CD16或者CD56的情况，若确认实验操作无问题，需结合该患者的临床诊断、用药情况等综合分析可能出现此情况的原因
2.5 解决方法 标本前处理时洗血，可以用PBS缓冲液洗血，3000转/分离心5分钟，吸弃上清，重复此步骤2次。该方法可以解决45/SSC图界线不明显、CD3/SSC图阴阳性区分不开、十字门划分受散点影响、使用药物等原因导致分不明显的问题。
四、讨论
随着医学的发展，淋巴细胞亚对于临床的意义也越来越重要，同时对实验室的要求、操作员的要求也越来越高。对于实验室来说，不管是标本的前处理过程，还是实验操作的过程，又或者是分析的过程，都存在很多的问题，有主观因素，也有客观因素，我们应当控制解决客观因素，通过提高自我来减少主观因素，增加实验的可重复性，不断探索和寻淋巴细胞亚的质量控制方法。
实验前处理过程中容易出现各种因素导致标本质量不合格，需要我们认真核对各种信息，认真检查标本的质量，由于质量问题而不能检测时，应及时和临床沟通。
实验操作做过程中，各个步骤可能会出现的由于细节不达标、操作不规范等导致的加错标本、漏加抗体、过度溶血、不及时上机等问题，需要我们规范每一步流程，减少因操作原因导致结果不准确性。
分析过程中出现的散点图界线不明显、十字门划分受散在点影响、药物和疾病导致的细胞不分等问题，可以通过提前在标本前处理时洗血、分析时反向设门、不能分时与临床沟通询问患者信息的方法来解决这些问题。
医学是不断进步的，流式细胞术也是不断发展的，未来的流式细胞术可能会向着信息化、自动化、智能化的方向发展，这需要我们所有流式人的共同努力。综上所述，统计归纳各种可能影响淋巴细胞亚分析的问题，提出解决方案，并知行合一预防，可以极大地提高淋巴细胞亚结果的准确性，并且十分方便快捷，可以推广使用。
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