2×CTAB法植物总DNA提取
1. 液氮研磨1g左右的植物组织，转移到离心管中。改用研磨在冰上研磨，不加β-巯基乙醇 研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完，则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。 2. 加入500µl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。
3.取出离心管，加入等体积的24：1（：异戊醇），上下颠倒充分混合。
若量多，则可以直接侧立于摇床上晃动10分钟。
4.12000转速离心5-10min。将离心管动作轻缓的取出转子，放置于离心管架上。
a.离心后溶液分三层：上层为水相；中层为碎片和蛋白相；底层为氯仿 b.迅速进入下一步，以免各相混合
5.用移液吸取管中上层水相，动作一定要轻缓，不可搅动其它两层。
a.此步骤要宁舍不贪多，尽量避免吸取到下层液体。
b.若上步骤中中间层较厚，则继续加入等体积24：1，再次抽提一次，直至中间层较薄。
6. 在抽提出的水相中加入1/3体积的5M的KAc及等体积的异丙醇（4℃预冷），轻轻晃动混合均匀后在-20℃沉淀。沉淀至少15分钟至过夜。 6-1 在抽提出的水相中加入1/10体积醋酸钠（钢球级配pH5.2, 3M），混匀后，加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃沉淀15min至过夜。
6-3. 在抽提出的水相中加入加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃沉淀15分钟至过夜。
a.时间越长，DNA的产量越多，污染也越多
7. 12000转速离心5-10min，去上清，倒置于吸水纸上数分钟，加入700µl 70%的酒精，上下颠倒数次，洗涤沉淀。12000转离心5-10m，去上清，倒置于吸水纸上数分钟。重复一遍。
8. 12000转速离心5-10min，去上清，倒置于吸水纸上数分钟，最后置于超净工作台中吹干。
9. 在离心管中加入30-50µl的灭菌去离子水或者TE溶液，4℃放置数小时，使其充分溶解。
10.用琼脂糖凝胶检测结果。
11. -20℃—— -70℃低温保存。
去除总DNA中的 RNA污染 先做预扩增实验，若RNE污染无严重影响则舍去该步骤
A
1. 在总DNA溶液中加入灭菌去离子水或者TE溶液调整总体积至200µl, 加入10µ RNase-A（10mg/ml）4℃过夜，或者37℃ 1h .
传动装置
2. 用等体积的24：1抽提。
3. 沉淀DNA——洗涤DNA——干燥DNA——溶解DNA—— -20℃—— -70℃低温保存。
B 直接加入10µ RNase-A（10mg/ml）后冷冻保存。
试剂配方
1M Tris-HCl ( pH7.4, 7.6, 8.0 )
pH | 浓HCl | Tris | 去离子水 |
7.4喉管 | 约70ml | 121.1g | 定容至1升 |
7.6 | 约60ml | 121.1g | 定容至1升 |
8.0 | 约42ml | 121.1g | 定容至1升 |
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注意：应该在溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH大约降低0.03个单位
5×TBE缓冲液
Tris | 硼酸 | 0.5M EDTA （pH8.0） | 去离子水 |
54g | 27.5g | 20ml | 定容至1L |
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室温保存
50×TAE缓冲液
Tris | 冰乙酸 | 0.5M EDTA （pH8.0） | 去离子水 |
242g | 电暖水袋 57.1ml | 100ml | 定容至1L |
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室温保存
2×CTAB
成分 | 终浓度 | 已有溶液浓度 | 配100ml所加量 |
CTAB | 2% | | 2 g |
Tris-HCl（pH8.0） | 100mM | 1M | 10 ml |
EDTA | 20 mM | 0.5M | 4 ml |
NaCl | 1.4M | 5M | 28 ml |
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0.5M EDTA （pH8.0）
二水乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA·2H2O | NaOH | 去离子水 |
186.1g | 约20克 | 定容至1L |
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高温高压灭菌，室温保存。
注：只有pH值接近8.0时，EDTA才能完全溶解。溶解过程可在磁力搅拌器上剧烈搅拌。
耗材准备：
需要灭菌者： 1.5ml离心管、研磨头、蓝头、黄头、
其他：卫生纸（吸水用）、镊子、封口膜、挑菌针、酒精灯、70%酒精、离心管架子、离心管盒子、移液。
CTAB法提取植物基因组
药品：
2*CTAB
终浓度 组分 药品用量
0.1M/L 1M Tris-HCl(pH8.0) 100ml
20nM/L 0.5M EDTA(pH8.0) 40 ml
NaCl 82g
CTAB 20g
PVP40 20g
加去离子水800ml 充分溶解定容到1L。120℃ 1.5个大气压，灭菌20分钟
用之前加0.2-1%的
0.5M EDTA(pH8.0)
配制量： 1L
配制方法：
1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存
1M Tris-HCl(pH8.0)
氯仿 ：异戊醇 24:1 异丙醇
流程
1、研钵预冷，叶片放入研钵，加液氮，研磨成粉末，用小勺放入2.0mlEP管。
2、加入65℃预热的2*CTAB 600ul,摇匀;
3、65℃水浴1小时，10min摇动一次
4、12000rpm离心10min, 取上清到一新的EP管中。（次步骤视情况可省略）
5、加入200ul 氯仿 ：异戊醇 ( 24:1)。
6、12000rpm离心10min, 取上层水相到一新的EP管中。
7、加入等体积的异丙醇，轻轻上下摇动10次，静置10min。
8、12000rpm离心10min，弃上清
9、加入75%乙醇1.0ml,摇动
10、12000rpm离心2min，弃上清
11、吸取多余乙醇，室温吹干
12、加入50ul的ddH2O,或TE溶解。
-20℃保存
CTAB法提取植物基因组DNA
CTAB法原理
CTAB（Cetyl trimethyl ammonium bromide），十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸的特性。
当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，CTAB-核酸的复合物从溶液中沉淀，通过离心就可将其与蛋白，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)， CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前
必须预热，且离心时温度不要低于15℃。另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。
主要试剂与溶液的配制：
PVP（聚乙烯吡咯烷酮K30）
巯基乙醇
氯仿︰异戊醇（24︰1）
异丙醇
70%乙醇
Tris-苯酚
RNaseA
无水乙醇
CTAB 溶液：CTAB——20g/L
NaCl（58.44）——1.4 mol/L（81.816g）
EDTA（292.25）——10 mmol/L（2.9225g）
Tris（121.14）——100 mmol/L（12.114g）
pH 8.0
1×TE 缓冲液：EDTA（292.25）——1 mmol/L（0.29225g）
Tris（121.14）——10 mmol/L（1.2114g）
pH 8.0
NaAC溶液：NaAC（82.03）——3mol/L（246.09g）
pH 4.0
植物总DNA的提取
1、取适量甘薯新鲜叶片，用液氮迅速研磨，中间加PVP（聚乙烯吡咯烷酮K30）少许，成粉末后转入10mL的离心管中，放入液氮或-80℃冰箱储存（在研磨样品时，研的细和研的粗，提出的DNA量可以相差几倍，所以，在液氮保护的很好的情况下尽量多研磨几次）。
2、将（200ml）CTAB溶液放于65℃水浴锅中预热。
3、加4ml巯基乙醇到预热的200mlCTAB中。
4、速加3ml预热的flag标签抗体CTAB到装有粉末的10mL离心管中，之后放入65℃水浴锅中，保温30~60min，期间轻摇数次（一般20min左右一次，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔）。
5、加入3~4ml氯仿︰异戊醇（24︰1）（在通风橱中操作），轻摇混匀至乳白（100~200次，剧烈晃动会使DNA机械切割）。
6、15~20℃，11000 rpm离心15min（CTAB配平，相对应的离心管，质量相差<0.03g）。
7、取上清（用剪过的头进行操作，过尖的头会把DNA链弄断。），加0.6倍体积的异丙醇，摇均（有絮状物析出，可放入4℃冰箱过夜）。
8、用毛细玻璃管将DNA絮状物挑出（DNA絮状物尽量要挑出，不要离心，因为离心后虽然产量会增大，但是不完整的DNA也增多）（或4℃，10000 rpm离心5min，弃上清），放入新的离心管中，用70%乙醇漂洗2次，放置超净台中吹干。
9、加入2ml 1×TE缓冲液溶解，可放入4℃冰箱保存（酶活性在4透明显示℃或65℃水浴中最低，防止酶降解DNA）。
10、未溶解的，可放入65℃水浴中促其溶解，10min后拿出冷却至室温，可重复，直至溶解。
11、加入2.5ul RNaseA（RNaseA提前拿出融化），10℃离心，升至4000 rpm即停，使RNaseA和溶液充分混合。
12、37℃水浴，保温1h。
13、加入1ml Tris-苯酚、1ml氯仿︰异戊醇（24︰1），摇均配平，4℃，11000 rpm离心10min。
14、取上清，加1×TE补至2ml，加2ml氯仿︰异戊醇（24︰1）摇均配平，4℃，11000 rpm离心10min。
15、如仍有白蛋白质沉淀，则重复步骤14。
16、取上清，加0.1倍上清液体积的NaAC，2.5倍上清液体积的无水乙醇（提前放入-20℃冰箱），摇均，放入-20℃冰箱沉淀30min。
