王韬;仇全雷;杜艳仓;陈润生;刘祥义
【摘 要】用苯酚-硫酸法对14个昭通天麻样品及3个外购天麻样品进行多糖含量测定.结果显示:在490 nm波长处测定吸光度,在浓度0-112.0μg/mL之间线性关系良好(r=0.997 3);精密度试验,RSD=0.07%;稳定性试验,RSD=1.67%;加样回收率100.6%,RSD=1.37%;该方法简单、准确;昭通市彝良县小草坝乡一带所产的天麻样品多糖含量为10.4%-21.6%,其多糖含量普遍高于其他地区,可作为判别昭通天麻品质优良的依据之一.%The polysaccharides content in 14 samples of Gastrodia elsta produced in Zhaotong and 3 samples of G. elsta bought outside Yunnan Province was determined by means of applying phenol-sulfuric acid method. The absorptiophotometric determinations were carried out at 490 nm. There was a linear relationship between the photometric value and the concentration within the scale of 0 - 112.0 μg/mL ( r = 0. 997 3 ). The RSD value of precision test was 0.07％ , the RSD value of stability test was 1.67％ , and the recovery rate and its RSD value were 100.6％ and 1.37％ respectively. The results of the study indicated that the determination of polysaccharide con tents by phenol-sulfuric acid method was simple but accurate, the polysaccharides content in the G. elsta produced in Xiaocaoba Township of Yiliang County, Zhaotong Prefecture was 10.4％ - 21.6％ , which was generally higher than those produced from other regions. The polysaccharides content might be adopted as one of the indexes to identify the quality of G. elsta produces.
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【期刊名称】《西南林业大学学报》
【年(卷),期】2011(031)001
【总页数】3页(P31-33)
【关键词】昭通天麻;多糖;苯酚-硫酸法
【作 者】王韬;仇全雷;杜艳仓;陈润生;刘祥义
【作者单位】西南林业大学资源学院,云南,昆明,650224;西南林业大学资源学院,云南,昆明,650224;西南林业大学资源学院,云南,昆明,650224;西南林业大学资源学院,云南,昆明,650224;西南林业大学资源学院,云南,昆明,650224
【正文语种】中 文等离子发动机
【中图分类】Q539
天麻(Gastrodia elsta Bl.)为兰科天麻属真菌异养型多年生草本植物。在我国主产于云、贵、川、藏4省区，此外，陕西、河南、安徽、江西、湖北及东北各省也有分布。药用其干燥块茎，味甘、性微温、祛风、镇痉。主要用于高血压、眩晕、头痛、口眼歪斜、肢体麻木、小儿惊厥、癫痫抽搐、破伤风，是我国传统名贵中药之一[1-4]。现代药理研究表明,天麻还具有增智健脑、清除自由基、延缓衰老的作用,对老年性痴呆有一定的疗效[5]。
昭通天麻的产地主要分布于五莲峰山脉和乌蒙山脉的交汇地带,该地由于受特殊的“昆明准静止峰”气候类型的影响,常年云雾笼罩,冬季温暖,夏季凉爽,空气湿度较大,年平均气温 15 ℃ 左右,阔叶林生长茂盛,以腐殖土为主,土壤中含有丰富的天麻赖以生存的萌发菌和蜜环菌,是天麻最适宜的生长环境。药用天麻的4个变异类型：乌天麻(G. elsta f.glauca.)、黄天麻(G. elsta f.flavida.)、红天麻(G. elsta f.elata.)和绿天麻(G. elsta f.viridis.)在昭通均有分布[6]。特别是昭通彝良县小草坝是天麻的原产地，所产天麻个大、肥厚、饱满、半透明、质实无空心，品质优良，是昭通天麻的代表，也是云南天麻的代表，素有“云天麻”之称[7]。目前，
错误反馈昭通天麻已成为云南省第3个原产地域保护产品。
天麻的有效成分有天麻素、天麻苷元、香草醛、香草醇、嘌呤类、天麻多糖、氨基酸和微量元素等[8]。最早的研究主要集中于天麻素和天麻苷元方面。目前，其他成分的研究越来越引起人们的重视，天麻多糖就是其中之一。天麻多糖有抗眩晕、抗衰老、降血压、增强免疫、抑菌和抗病毒等多种药理作用[9]。 本文以苯酚-硫酸法对产自昭通不同地区的14个人工栽培天麻样品和3个外省天麻样品进行多糖测定和比较。
1 材料与方法
1.1 样品制备
2010年1月中旬，在昭通各产地分别采集鲜“冬麻”2 kg左右,洗净泥沙，剔除腐败变质部分，切成薄片，在70 ℃烘箱中通风烘1 d左右至干，粉碎，过100目筛，得干粉，保存备用。其他省份的3个天麻样品均购自昆明市菊花村中药市场，同样粉碎过筛备用。天麻品种及产地信息见表1。
电动操作机构表1 天麻样品采集信息编号产地品种1彝良县 小草坝乡 大荞村 刘家湾乌天麻2彝良县 小草
坝乡 海子公社 大棚绿天麻3彝良县 小草坝乡 海子公社 白泥巴洞乌天麻4彝良县 小草坝乡 海子公社 三岔湾乌天麻5彝良县 小草坝乡 海子公社 彪水岩乌天麻6彝良县 小草坝乡 海子公社 水沟儿乌天麻7彝良县 小草坝乡 海子公社 肖家坟乌天麻8彝良县 小草坝乡 高坎公社 大保乌天麻9彝良县 小草坝乡 三道村 冯七沟乌天麻10彝良县 荞山乡 关房村 泡桐湾乌天麻11彝良县 龙安乡乌天麻12镇雄县 木沙树乡 细木沙河村乌天麻13大关县乌天麻14绥江县乌天麻15贵州省乌天麻16广西省乌天麻17河南省乌天麻
1.2 样品预处理
门窗封条
取适量天麻干粉，按料液比1∶60加入80%乙醇，在 60 ℃ 水浴中回流提取2 h，倒去液体，残渣再重复提取1次，除去天麻中的单糖、低聚糖、素及脂类等[6]。残渣用无水乙醇脱水，置阴凉处晾数日至干[10]，粉碎，置棕广口磨口瓶中备用。
1.3 试剂与仪器
试剂：葡萄糖、苯酚购自天津市化学试剂三厂，硫酸购自汕头市达濠精细化学品有限公司，碳酸氢钠购自天津市协和昊鹏谱科技有限公司，无水乙醇购自天津红岩化学试剂厂，均为分析纯；铝片。
仪器：7200可见分光光度计，0412-1型离心机，KH-400KDB型高功率数显控超声波清洗器。
苯酚试剂：称取约5 g重蒸酚(苯酚 50 g，铝片 0.05 g 和碳酸氢钠 0.025 g，常压蒸馏，收集 182 ℃ 馏分)，用新鲜蒸馏水溶解于 100 mL 容量瓶中定容，配制成5%溶液置棕瓶中，放入冰箱储存待用。
1.4 对照品与供试品溶液的配制
对照品溶液：精确称取葡萄糖(105 ℃恒质量)0.100 0 g，用蒸馏水溶解于100 mL容量瓶中定容，配制成 1.000 mg/mL溶液待用。
供试品溶液：精确称取1 g用80%乙醇提取并干燥过的天麻粉预处理样品，以超声波提取法的最佳提取条件(以蒸馏水为溶剂，温度65 ℃、料液比1∶20、提取时间20 min)提取，提取液用 4 000 r/min离心机离心10 min，弃除沉淀，上清液用100 mL容量瓶定容待用。
2 结果与分析
2.1 测定最大吸收波长
精确量取1.0 mL对照品溶液于比管中，加蒸馏水补至 4.0 mL，空白用 4.0 mL 蒸馏水，依次加入 1.0 mL 苯酚溶液，5.0 mL 浓硫酸，摇匀于沸水中加热 10 min，取出后稀释至 25.0 mL，冷却至室温。用分光光度计作全波长扫描，结果在490 nm处吸光度有最大吸收，故选用 490 nm 作为测定波长。
2.2 绘制标准曲线
分别精确量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL对照品溶液于不同比管中，在 490 nm 测吸光度，结果见表2，绘制标准曲线，如图1，回归方程：y=8.482 9x-0.010 9，r=0.997 3。
表2 苯酚-硫酸法测定的系列标准溶液吸光度编号12345678浓度/(mg·mL-1)0.0000.0160.0320.0480.0640.0800.0960.112吸光度0.0000.1200.2400.3860.5760.6380.8270.926
2.3 精密度试验
精确吸取2.0 mL对照品溶液5份，置于不同比管中，在490 nm测吸光度，结果见表3。
表3 苯酚-硫酸法的精密度试验序号12345吸光度0.6370.6360.6360.6360.636
注：RSD=0.07%。
2.4 稳定性试验
精确吸取1.2 mL供试品溶液，置不同比管中，放置1.0 h后每隔0.5 h在490 nm测吸光度，结果见表4。
表4 苯酚-硫酸法的稳定性试验时间/h1.01.52.02.53.0吸光度0.3410.3400.3370.3300.329
注：RSD=1.67%。
2.5 加标回收率试验
称取初处理的天麻样品1.000 6 g，配制供试品溶液，在490 nm测吸光度，计算样品天麻还原糖含量为 0.143 2 g。再分别取0.5 mL供试品溶液6份，置于不同比管中，在490 nm测吸光度。再分别加入葡萄糖0.143 2 g，在490 nm测定吸光度，结果见表5。
表5 苯酚-硫酸法加标回收率试验吸光度0.4800.4790.4770.4740.4710.478回收率/%102.1101.6100.899.698.4101.2
注：平均加样回收率=100.6%和RSD=1.37%。
2.6 样品天麻多糖含量
把初处理后的17个天麻样品，各精确称取2份，每份1 g，在490 nm测吸光度，用回归方程计算多糖浓度，进而计算天麻样品多糖含量，结果见表6。
表6 17个天麻样品的多糖含量 %样品编号123456789多糖含量13.716.513.018.310.421.615.613.014.6样品编号1011121314151617多糖含量21.29.649.5411.69.409.8110.613.0
在测定的17个天麻样品中，昭通彝良县小草坝乡一带所产的9个天麻样品的多糖含量为10.4%～21.6%，普遍较其他地区高，据此可8为原产地域产品昭通天麻的优良品质提供依据，也可为彝良县小草坝乡作为最适宜栽培天麻的地区提供理论支持。
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