棋盘滴定法

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棋盘滴定法选择抗体的最适工作浓度
a) 用包被缓冲液稀释单克隆抗体，浓度分别为10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、信息提取1.0ug/ml, 包被酶标板，每一浓度包被三个纵行，每孔100ul，每孔均作复孔。4 ℃过夜，PBST凝胶珠洗涤3次；
b) 5%男性功能内裤脱脂奶粉封闭酶标板， 37℃孵育1h，洗涤3次；
c) 在横行包被孔中依次加入空白对照，阴性对照血清，弱阳性抗原液及强阳性抗原液，各100ul,37℃孵育1h，洗涤3次；
d) 在每一包被浓度的一个纵行中分别加入按1:2000、1：5000纳米除臭装置、1：10000 稀释的多抗， 37℃孵育1h，洗涤3次；
e) 在每一包被浓度的一个纵行中分别加入HRP标记IgG抗体，稀释度先按说明书上的，37℃孵育1h，洗涤3次；
f) 加TMB数据存储安全检测底物，37℃避光显10-15min，用2mol/L H2SO4终止反应，酶标仪450nm读取吸光度（OD）值；
g) 测得的强阳性抗原液OD值在1.0左右，阴性对照变径套OD值小于0.1的组合为较理想的组合。
可根据初步确定的浓度缩小间距,再做进一步棋盘滴定,寻最佳包被条件。
抗体做稀释时最好用同一个原始浓度做倍比稀释，这样可以尽量减少由于加样造成的误差及人为误差。

紫癜

过敏性紫癜是常见的毛细血管变态反应性疾病，又称为出血性毛细血管中毒症，是因变态反应引起毛细血管广泛性炎症，血管壁渗透性增高和脆性增加所致。以皮肤紫癜、消化道粘膜出血、关节肿胀疼痛和肾炎等症状为主要临床表现，少数患者还伴有血管神经性水肿。部分病人再次接触过敏原可反复发作。肾脏受累的程度及转归是决定预后的重要因素。

过敏性紫癜任何年龄均可发病，以儿童及青少年多见，2岁以下小儿及老年人少见；男性多于女性；四季均有发病，以春秋两季居多。

过敏性紫癜属中医“紫癜”范畴。

本文发布于:2023-06-04 06:58:37，感谢您对本站的认可！

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