免疫组化实验步骤及配方

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免疫组化实验步骤及配
方

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免疫组化步骤

1.多聚甲醛灌流取材，多聚甲醛后固定，30%多聚糖溶液沉糖；

2.冰冻切片（ld-14d 脊髓>=20 n m; 14d-28d>=10 u m;DRGd=10 u m）

3.0. 01MPBS 洗 10minX3 次;

4.1NHCL 暴露抗原 30min；

5.去离子水洗，0. 01MPBST洗10minX3二维液相谱次;

6.3%双氧水（0. 01MPBS配制）洗lOmin,灭活内源性HRP；

7.0. 01MPBST 洗 10minX3 次；

8.5%-10%血清封闭 30min （0. 01MPBST 配制）；

9.一抗过夜，一抗用PBST稀释；

10.0. 01MPBS 洗 10minX3 次,二抗 3 孵育小时；

11.0. 01MPBS 水性涂料分散剂洗 10minX3 次，HRP-亲和素 3 小时；

12.0. 01MPBS 洗 10minX3 次，DAB 显 12-18mino

免疫组化常用试剂配制

1.0. 1MPB:14. 5gNa:HP0.・ 12比0

500mLH20

1. 5gNaH：P0i ・ 2H：0

2.0. 1MPBS: 500mL0. 1MPB

45gNaCl

3.0. 01MPBST:100mL0. 01MPBS

10 滴 TritonX-100

4.INHCL:盐酸：水二 1： 10

5.4%多聚甲醛：13. 6gKH2P04

防火门铰链3. 6gNaOH

40g多聚甲醛

1000mLH20

注：1).需要60° C加热溶解，过滤使用；

对数天线旋转工作台2).多聚甲醛每次比需要多称10g,以弥补后面过滤的损失；

3).现将多聚甲醛溶于lOOOmL水中，然后一边加热搅拌一边缓慢加入多聚甲醛的助溶剂

NaOH,待NaOH和多聚甲醛都完全溶解后再加入KH2PO„溶后过滤备用。

电动6. DAB 液：以 0.. 1MPB 配制，DAB 浓度 0. 05%, HA 浓度 0.03%。

注：1).HQ：临用时再加；

2).用DAB染后用0. 01MPB洗。

7.30%蔗糖：150g蔗糖

500mL4%多聚甲醛

注：可同时沉糖后固定。

&封闭液：10%山羊血清(做免疫荧光时另加0. 1%BSA)-

本文发布于:2023-06-04 06:27:41，感谢您对本站的认可！

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