二 、【实验原理】
植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、【实验仪器和试剂】
仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸
物理除垢试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】
多倍频感应耐压试验装置培养基的配制
用于配制培养基的水最好是三蒸水。
氨分解制氢所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。 1、 MS培养基的配制
1）按照配方配制培养基时，先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml
2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.8
无水氯化镁
3）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
接线端子座4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
5）经高压高温灭菌后，由于某些成分的降解或氧化，酸度会增加（pH 值一般可降低0.2），因此调整pH值时应加以考虑。
2、灭菌
经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。
3、培养基的存放
经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。
4、植物愈伤组织诱导培养基的配制
1）每2人一小组，自由组合，固定。每5小组为1中组
2）MS培养基的配制
a、母液的配制
b、培养瓶洗刷
c、每中组配制500mlMS培养基，（含琼脂4.5g，蔗糖15g，2,4-D母液1ml），调节PH，分装，灭菌
3）每人准备100ml/瓶去离子水→灭菌（无菌水)
4）每人100ml烧杯/试剂瓶→灭菌（无菌烧杯）
5）每2人一套平板，清洗，灭菌
五、【实验结果及讨论】
略
六、【注意事项】
1、所有的东西都要即时标记好，日期，名称，浓度等(标注可以组别-姓名，如1-姓名或1-姓名单字母缩写）
2、自己用过的器皿要自己洗刷，并灭菌，以备下组同学使用。
3、实验结束后用过的仪器等恢复原样，清洁实验台面，一切东西归位。
石材背栓七、【思考题】
1、培养基配制应注意哪些问题？
答：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；
②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；
③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1
种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂边加热边用玻璃棒搅拌，直到
液体呈半透明状。
2、 培养基灭菌冷却后不凝固，请分析原因并提出解决办法？
答：灭菌后不凝固的原因在于pH值，研究表明当琼脂含量为2%时，pH值低于4时，琼脂便失去了凝固的能力，原因是由于琼脂是由复杂的多聚糖组成，在酸性介质中会水解生成还原糖或低聚糖，使其失去凝固性能。因此，为了灭菌冷却后能够能够正常凝固，实验中配制的培养基在灭菌前pH值不应低于6.0。
