顾婷婷是什么梗福建畜牧兽医第42卷第3期2020年
张慧瑛宁德市蕉城区畜牧兽医站福建宁德352100
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摘要因ELISA方法具有灵敏度高、特异性强等优点，使其成为基层兽医实验室常见的检测手段之一，但其对操作者的要求较高、需要注意的细节较多。本文就ELISA试验中应注意的几点事项进行探讨，以供参考。 关键词ELISA检测注意事项
文献标识码:B文章编号:1003-4331(2020)03-0041-02
酶联免疫吸附试验简称为ELISA，具有灵敏度高、特异性强、快速简便、准确等优点。ELISA是基层兽医实验室最为常见的一种检测技术，但该试验对操作要求比较高，一些细节操作不当就会对试验结果的准确性造成很大的影响。笔者以多年来从事基层兽医实验室检测工作的经验，就ELISA试验中应注意的几点事项作如下探讨，以供同行参考。
1试验前的准备
1.1样品ELISA试验中使用较多的是血清样品。在全血采集时，采血过程要求无菌，同时避免出现溶血现象。离心后的血清，短期可置于4℃保存；短时间内无法及时检测的，应置于-20℃保存，避免反复冻融。 塑料静电分离机靠谱吗1.2试剂所有试剂、反应板在使用之前应恢复至室温。回温前，应先查看试剂盒是否在有效期内；此外，还需检查试剂的状态是否正常，如TMD底物是否已经显变质。使用过期或变质的试剂会影响检测结果。 1.3试验操作当前基层兽医实验室为了保证结果的准确性，所使用的试剂盒除了国产外，还有使用进口试剂盒。试剂品种较多，因生产厂家不同，从而操作方法不同；有的同一厂家同一病种不同批号的试剂盒，操作方法亦有不同。因此，试验前一定要先熟悉步骤，避免因操作错误而导致试验失败，或因不熟悉步骤，操作时间过慢而影响试验结果。
易揭膜1.4试剂配制每个试剂盒对试剂的配制要求不同，有的需要配制样品稀释液，稀释阴阳性血清、被检样品和洗液，有的只需要稀释洗液，稀释前检查溶液是否有结晶析出，若有需用水浴锅或恒温培养箱融化，再根据说明书上要求的稀释倍数进行稀释，配制试剂应现配现用。
1.5环境试验前应通过空调来调节实验室温度，保证在恒温状况下(23~25℃)进行，并做好相关记录。
2试验操作2.1加样加样是ELISA试验中操作最多的一个步骤。每次加样前应充分混匀；使用多孔道移液器时，要注意每道的吸液量是否一致，如若不一致要进行调节；加样应加在板孔底部，速度要均匀，不能打得过快，避免产生气泡或飞溅至孔外；加不同样品时要更换吸嘴，避免交叉污染；加样的时间尽量缩短，尤其到显阶段对时间要求较高；加样过程中要专心，避免出现少加、多加、错加、漏加、重复加等现象。
2.2孵育对环境条件进行控制。进口试剂盒对温度的要求较低，只需室温即可；国产试剂盒则要求
37℃；此外，加底物溶液时需在暗室环境下进行；可利用培养箱、冰箱、湿盒等设备调节孵育温度、湿度。反应板要求平放，若多个板一起孵育，切不可叠放，避免因受热不均影响试验结果。
2.3洗板洗板是ELISA操作中很重要的一步，虽不是反应步骤，但往往决定试验的成败。一般用300μL洗液注满每孔，洗涤3~5次，最后1次洗涤后进行拍干。洗板方式有两种：一是基层最常用的人工洗板；二是使用洗板机洗板。人工洗板要求较高，与加洗涤液及甩板手法有关。检测样品数量多时可用洗板机洗板，使用前应对洗板机进行检查、清洗，确保洗涤时不出现失误。在洗板过程中，应避免液体溅出造成的反应孔交叉污染，洗板时间不宜过长，应避免反应孔底部包被结合物变干。
塑料保鲜盒>工字钮2.4读板读板前应提前预热酶标仪半个小时，严格按操作说明进行波长设置。加完终止液后，应尽快放入酶标仪读数，时间尽量控制在2min以内。放入酶标仪读数前，注意检查反应板的朝向；同时，拿反
应板的过程中应轻拿轻放，避免反应孔中的液体飞溅出来，既影响试验结果，又污染酶标仪。
3试验结果的判定分析
试验完成后要对结果进行判定并分析原因。若试验不成立，要查是否存在试剂盒变质、操作顺序有误、孵育时间、温度未按要求进行等。即使试验成立，还应对比阴阳性OD值，若阴性或阳性对照数值
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