柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)
1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠 2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可以根据须要而的定(内径18cm为不好)；1000-1500w电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。3.所需试剂：0.01m柠檬酸型缓冲液，ph=6.0±0.14.操作步骤：
(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。(2)取一定量ph=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pbs(ph=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。5.注意事项：
(1)冷却时间长短的掌控很关键，从非政府切片放进缓冲液至高压锅返回火源的总时间掌控在5-8分钟为不好，时间过长可能会并使染背景增进。(2)必须采用不锈钢或耐高温塑料切片架，无法采用铜架，以免缓冲液ph值升高而引致掉下来片。(3)高压锅返回火源后必须等缓冲液冷切后，就可以把切片抽出。(4)为避免非政府开裂，玻片必须经洁净处置后，涂覆poly-l-lysine(
(5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。edta抗原热修复法
1.适用范围：适用于于部分中性福尔马林紧固、石蜡上皮组织非政府切片的抗原复原。2.仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染架。3.所需试剂：edta抗原复原液，ph9.04.操作步骤： (1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品mvs-0098适量，按1:50的比例稀释。
(2)挑500ml抗原复原工作液于1000ml不锈钢锅中，轻易在电磁炉上冷却至融化后，调高
电磁炉功率并使锅内复原液维持微沸状态。将非政府切片放在耐高温染架上，再将染架缓慢放进不锈钢锅中(特别注意：若快速将染架扔进缓冲液中，往往可以引致瞬时的惨烈融化现象而导致非政府开裂)，之后盖章稳步冷却20分钟。再将不锈钢锅从电磁炉下移上开，室温下自然加热至室温后抽出切片，蒸馏水洗脸1次3分钟，pbs洗脸2次、每次3分钟。之后展开免疫组化染。5.注意事项：
(1)由于修复液蒸发量无法估计，所以修复液不能重复使用。(2)工作液的量必须保证切片始终能浸泡在液体内。
(3)为了避免冷却过程非政府脱片，须使用poly-l-lysine处置载玻片。(4)抗原复原后一定必须等工作液加热后，就可以将切片从工作液中抽出。柠檬酸缓冲液微波抗原复原法
1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果比高温高压修复差但比直接水煮好。2.仪器设备：微波炉(700-800w)。
3.所需试剂：0.01m柠檬酸型缓冲液，ph=6.0±0.1
4.操作步骤：
(1)常规非政府切片经二甲苯重熔、梯度酒精水化后，煮沸于蒸馏水中姜味。(2)挑一定量ph=6.0柠檬酸盐缓冲液(缓冲液量严禁<500ml)于微波盒中，微波冷却直到融化；将重熔水化后的非政府切片放在耐高温塑料切片架上，放进已融化的缓冲液中，中高档或中档稳步微波处置15-20分钟；抽出微波盒加热至室温，从缓冲液中抽出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pbs(ph=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。(3)按有关试剂盒的操作步骤继续执行。5.注意事项：
(1)微波时间长短的控制很重要，从组织切片放入沸腾的缓冲液到微波结束的总时间控制在15-20分钟为好。
(2)必须采用耐高温塑料切片架，无法采用不锈钢或铜架。
(3)微波过程中，如果缓冲液蒸发而量减少，无法浸泡到组织片，应该适当加上一些蒸馏水，以保证组织片都能浸泡在缓冲液中，继续微波。
(4)微波完结后必须等缓冲液加热后，就可以把切片抽出。
(5)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆poly-l-lysine(devil缓冲液的量(>500m
乳胶模具l)，必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法
1.适用范围：适合于中性福尔马林紧固、石蜡上皮组织非政府切片的抗原复原，其效果比高压复原法差。
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2.仪器设备：电炉(600w)、烧杯(1000ml)等。
3.所需试剂：0.01m柠檬酸型缓冲液，ph=6.0±0.1)。4.操作步骤：
(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。
(2)挑一定量ph=6.0柠檬酸盐缓冲液于烧杯中，放到电炉上冷却直到融化；将重熔水化后的非政府切片放在耐高温塑料切片架上，放进已融化的缓冲液中，稳步煎20分钟；烧杯返回火源加热至室温，就可以从缓冲液中抽出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用pbs(ph=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。(3)按有关试剂盒的操作步骤继续执行。5.注意事项：
(1)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防ph值改变而导致掉片。(2)煮好后必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
(3)为避免非政府开裂，玻片必须经洁净处置后，涂覆poly-l-lysine(
(4)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。影响抗原热修复的关键因素
免疫系统组织化学染中最关键的步骤莫过于抗原的复原了，而绝大多数常用抗体的复原就是通过冷却去顺利完成的，可以这样说道，抗原热复原就是免疫组化的关键技术，可以直接影响至最终的染结果。
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1、抗原热修复温度和时间的关系
非政府紧固液福尔马林可以引发非政府蛋白内或蛋白之间的亚甲基出现桥连，具体内容过程如示：上述反应的结果引致许多抗原决定簇被半封闭，而冷却可以水解该桥连并使抗原被转化成。影响抗原热复原的两个最关键的因素就是温度和时间，有人将这两种因素对抗原复原的影响总结为下面的公式：
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抗原热修复的有效性=加热温度（t）×加热时间（t）也就是说当我们修复时的温度越低则需要修复的时间就会越长；反过来当修复温度增高时则
复原的时间可以适度地延长，就可以并使抗原决定簇全然曝露，这种静电力的关系从mbi单克隆抗体的实验结果表中一中也可以确切地窥见。如果复原强度比较，免疫系统组织化学染所表明的就可以就是复原后暴露出的部分抗原决定簇，而不是非政府含有的全部抗原。这样的染结果可能会非常强，或发生假阴性，即使就是阳性结果，充其量就可以起著定性的促进作用，无法适应环境今后对免疫组化展开定量的须要
2、组织固定时间和所需的抗原热修复的关系
紧固时间越短的标本，它所构成的桥连就越密切，抗原就越难以被转化成，所须要的复原强度也就越弱。有意思的就是随着紧固时间的缩短，非政府中蛋白对温度的耐热也可以适当升高，这可能将就是我们对紧固时间短的标本加强复原强度的理论基础。这就告诫我们在搞回顾性研究时一定必须特别注意所采用的复原条件，它与新鲜标本的复原条件一定就是有所区别的，同等条件下一定必须加宽复原的时间或提升复原所采用的温度，才可能将获得比较满意的结果。3、相同ph值抗原复原液对染结果的影响
抗原热修复中所使用的修复液ph值也会对染结果产生相当大的影响。ph值对染结果的影响大概可以分为以下四种情况。
cng撬装加气站 a―稳定型，ph值对染结果的影响并不大，如pcna、ae1、ema、cd20等。
b―v型，高ph值和低ph值染较好，而ph值4-6染结果较差，如er、ki-67等。c―上升型，随着ph值的增加，染结果逐渐增强，如hmb45等。
d―上升型，随着ph值的减少，染结果逐渐弱化，当然这种类型的抗体只是个别的现象，如moc31。
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一个有趣的现象值得注意，即在高ph值（约ph8.0~9.0），a、b、c三者都有较好的染结果，所以目前比较推崇的抗原修复液为高ph值的修复液，如1mmedta,ph8.0或ph9.0等。但是由于传统习惯，绝大多数医院和实验室都在使用ph6.0的枸橼酸缓冲液。综合以上各种抗体的染状况，考虑到临床工作的实际情况，许多国外免疫组化专家建议，在常规的免疫组化工作中，全部选用高ph值的修复液来代替目前广为使用的ph6.0枸橼酸缓冲液。为此，本公司已经推出ph8.0和ph9.0的新型抗原修复液。经验证，绝大多数的抗体使用ph9.0
的修复液效果都要优于ph6.0的枸橼酸，尤其是核阳性的抗体。所以，在常规的免疫组化工作中，使用高ph值的抗原修复液是今后的必然趋势。4、抗原热修复的手段
目前抗原热复原所使用的方法主要存有微波炉复原和高压锅复原两种。高压复原具备温度均一、节省时间、效果平衡等特点。5、抗原热复原具体操作过程可以根据实验室的具体条件，采用微波炉抗原复原、高压锅抗原复原或水浴高温抗原复原。抗原热复原可以采用各种缓冲液，如tbs、pbs、重金属盐溶液等，但实验证明，以1mm的edta抗原复原液（ph8.0或ph9.0）效果最出。
