超声提取固相萃取液相谱/a重四级杆质谱法测定土壤中的15种苯胺类化合物 丁炜炜许晓燕周丽珍黄成李娜
(韶关市环境监测中心站，广东韶关512026)
摘要：建立了超X提取—固相萃取—液相谱/三重四级杆质谱法测定土壤中的15种苯胺类化合物的分析方法&结果表明，15种苯胺类化合物在0.5〜10(#g・L1(间-硝基苯胺在1〜20(#g-L1)范围内线性关系良好，相关系数(R)均大于0.993；空白基质加标回收率为77.5%〜124%，相对标准偏差为1.4%〜9.8%；对壤土和砂土2种土壤样品进行加标测试，其回收率分别为80.0%〜121%和75.0%〜117%&结果表明该方法抗干扰能力强、灵敏度和准确度高，能满足土壤中多种苯胺类化合物同时测定的要求。 关键词：液相谱/三重四级杆质谱法；超X提取；固相萃取；苯胺类化合物；土壤
bbzs0引言
苯胺类化合物(aniline derivatives)在医药、橡胶和染料等工业和农业中被广泛地用作重要原料和中间体，同时，又因其具有明显致癌作用和强毒性，是我国规定的优先控制污染物1。由于土壤基质的物理化学吸附作用，苯胺类化合物进入环境后极易在土壤中积累，对环境造成持久的危害。通过监测土壤中苯胺类化合物的污染情况，对环境监控及污染治理具有重要意义，也可为相关法律法规的制定与
执行提供科学依据。
目前，国内常用的土壤样品的提取方法包括微波提取(@AE)、加压流体萃取(ASE)、索氏提取(SOX)、超声提取(UE)等〔58。由于苯胺类化合物大多热不稳定，且极易在浓缩过程中损失，因此选择超声提取的方式，通过实现低温萃取以减少提取过程中的损失(国内苯胺类化合物的检测方法主要有可见光分光光度法、毛细管电泳法、离子谱法、气相谱法、液相谱法、气相谱质谱法、液相谱/三重四级杆质谱法等卩5。其中，液相谱/三重四级杆质谱法具有抗干扰能力强，定量分析灵敏度高的特点，适合土壤这类复杂基质中苯胺类化合物的分析。
本文采用超声提取-固相萃取-液相谱/三重四级杆质谱法对土壤样品中的15种苯胺类化合物进行分析测定。根据内标物与被测组分有基本相同的物理化学性质且待测组分中不存在的选择原则，本次实验选用14种氛代苯胺类内标物对苯胺类化合物进行定量分析。通过对该方法的标准曲线、检出限、精密度和准确度进行分析探讨，为土壤样品中苯胺类化合物的定量分析提供了科学依据。
1实验部分
1.1主要仪器与试剂
主要仪器:U-3000&AB API4000+液相谱—三重四极杆质谱仪；Agilent ZORBAX Eclipse Plus C8
谱柱；TDL-40B离丿卜机；AS5150B超声波清洗器;Su-pelcoVisiprep DL固相萃取装置；LGJ25C型真空冷冻干燥机。
主要试剂：正己烷(Pesticide Grade,Thermo Fisher Scientific)；丙酮(HPLC Grade, MREDA)+二氯甲烷(HPLC Grade,Thermo Fisher Scientific)；甲醇(HPLC Grade,Thermo Fisher Scientific)；甲酸(HPLC Grade，天津科密欧化学试剂有限公司)；氨水(HPLC Grade，天津科密欧化学试剂有限公司)(
1.2样品采集与保存
采集0〜20cm深度的土壤表层样品，置于洁净的聚四氟乙烯衬垫棕螺口玻璃瓶中，于4°C以下的冰箱中冷藏、避光、密封保存。
1.3样品制备
1.3.1土壤样品预处理
使用真空冷冻干燥机对土壤样品进行冻干脱水处理，将处理过的样品充分研磨、过筛，均化成约1mm 的颗粒。
1.3.2样品提取
称取5,00g冻干样品至离心管中，依次加入1g Na2S2O3•5H2O、50.0pL混合内标使用液、10.00mL 正己烷-丙酮混合溶剂1：1(V/V)和10(#L氨水，密封漩涡混匀30s。冰浴超声(<25C)提取30min, 6000rpm离心10min，取上清液经0,22#m针式滤器过滤，滤液待净化。
133
准确移取2.00mL过滤后的萃取液转入C s柱内，用5mL甲醇洗脱。待洗脱液浸满净化柱后关闭流
《湖北农机化$021年第3期
速控制阀，浸润5min ，再打开控制阀，接收洗脱液至完 全流出。室温下，将净化后的洗脱液 浓缩并用甲
醇准确定容至1.0mL 。
1.3.4上机溶液的制备
准确移取25(#L 净化浓缩后的洗脱液，加入
75(#L 去离子水，混匀，用0.22#m 针式滤器过滤后转
瓶，待上机
。
1.4仪器分析条件
141
本次实 ESI 正离子模式进行扫描，检测模式为
(@R@)；离子化参数：离子喷雾
电压:5500V ；气帘气为氮气，35psi ；雾化气为氮气,
60psi ；辅助气为氮气，60psi,，
：600°C ；质谱
参数见表1。
表1 15种苯胺类化合物和14种内标物的MRM 参数
化合物
质核比(rn/z )
去簇电压DP(V )
碰撞能量CE(V )碰撞室出口
电压CXP(V )
定量内标
母离子子离子
771
2614苯胺93. 9511604298苯胺-D
91.0"
26
8
对-甲基苯胺
108 0
651603612对-甲基苯胺-D
1090'236邻- 氧
邻-甲氧基苯胺124. 2800504116苯胺-D 91.0"
2416
间-甲基苯胺
108 0651573512苯胺-D
91.0"2416邻-甲基苯胺无焰泄爆装置
108 0
651573512邻-甲基苯胺-D
107.0"22102，4-二
2,4-二甲基苯胺
122. 1791523115苯胺-D
1221"
168
对-硝基苯胺
139. 092056
296对-硝基苯胺-D 762"407间-硝基苯胺
139. 0931602410间-硝基苯胺-D
931"25
64-氯苯胺12& 0
1110503174-氯苯胺-D 1270"
22cccc
30132-荼胺
144. 0771*******-荼胺-D71050"24172，6-二
2,6-二甲基苯胺
122. 1790462815苯胺-D
931"
25
6
3-氯苯胺12& 0
1110503173-氯苯胺-D 1690"1611
N —亚硝基
N-亚硝基二苯胺
199. 1661633613二苯胺一D6
1679"2610联苯胺
185. 01410803510联苯胺-D
2170"
28143,3-二氯联
3,3-二氯联苯胺
253. 0182180
4012苯胺-D
苯胺-D
99. 0
82.1"
5029
6联苯胺-D 193. 0174.2"80
31
123,3-二氯联苯胺-D&259. 2160.1"1205214N-亚硝基二苯胺-D
205. 3175.1"
61
18
13
对-甲基苯胺-D 115. 197. 9502&6邻-甲氧基苯胺-D
127. 0109. 0
6223
7
邻-甲基苯胺-D 114. 997. 974
2&202,4-二甲基苯胺-D&12& 1
110. 17&277
对-硝基苯胺-D
142. 9126. 0
6619
&
间-硝基苯胺-D
143. 197. 165
2364-氯苯胺-D 130. &96. 0682762-荼胺-D
151. 2131. 96734
92,6-二甲基苯胺-D&
12& 1
111. 0
6025&
3-氯苯胺-D
131. 196. 052
25
10
为定量离子1.4.2谱条件
进样量：10#1；柱温：35_；流速：0. 3ml/min ；流动
相A ：酸化甲醇1 + 10000；流动相B ：甲酸溶液1 +
10000。梯度洗脱程序见表2。
表2梯度洗脱程序
时间(min)
A%B%03565
5
955795
57. 1
356514
35
65
2 结果与讨论
2, 1标准曲线和检出限
用混合内标使用液稀释苯胺类混合标 液
配制8个浓度点的标准系列，按照2. 4节中的仪器条
件，浓 低到高依次 ，标
内标物的总
离子流图见图1(
1：联苯胺-Ds ； 2 ：联苯胺；3 ：苯胺-D ； 4 ：苯胺；5 ：对甲苯胺-
D 9；6：对甲苯胺；7：邻甲氧基苯胺-D3；8：邻甲氧基苯胺；9：
间-甲苯胺；10：邻-甲苯胺-D 9 ； 11：邻-甲苯胺；12：2,4-二甲 基苯胺-R ；13：2,4-二甲基苯胺；14：对硝基苯胺-D 。； 15 ：对
硝基苯胺；16 ：间硝基苯胺-D 。； 17 ：间硝基苯胺；18:4-氯苯 胺D ；19：4-氯苯胺；20：2-< 胺-D7 ； 21: 2-蔡胺；22：2,6-— 甲基苯胺-D 6 ； 23 : 2,6-二甲基苯胺；24：3-氯苯胺-D 3 ； 25 ： 3-
氯苯胺；26：3,3'-二氯联苯胺-D 6 ； 27 : 3,3'-二氯联苯胺；
28：N-亚硝基二苯胺-D ；29：N-亚硝基二苯胺
图1 15种苯胺类化合物及14种内标物的总离子流图
以标准溶液中目标化合物的浓度与对应内标物
浓度的 为横坐标，目标化合物的峰面积与对应内
标物峰面积的比值为纵坐标，权重为1/(x *x )绘制标
线。其标 线的线性方程和相关系数R 见表
3，可知15种苯胺类化合物在0. 5〜10(#g - L 1 (间-硝
基苯胺在1〜20(#g ・L 1)范围内的相关系数(R)均大 0993'线性 。
称取空白石英砂5. 00g 共7份至离心管中，按照
上 的步骤进行平行测定，将各测定结果换算为
中的浓度，计算其标
S，由公式MDL
=St (,0.99) ((6,0.99) = 3. 143)计算得到方法检出限。由
表3中数据可知15种苯胺类化合物的方法检出限在
0. 4〜1. 3# • kg"之间。
《湖北农机化》2021年第3期
表315种苯胺类化合物标准曲线
化合物名称线性范围
(遽•L-)
线性方程
相关系数
(R)
铜工艺检出限
(#g•kg1)
苯胺0.5-100Y—0.00262+1.74853X0.99920.5邻-甲氧基苯胺0.5-100Y—0.000548+1.15X0.9970.4 2-荼胺0.5-100Y0.00182+0.14061X0.9980.4对-甲基苯胺0.5-100Y-0.000338+1.26055X0.99940.6
间-甲基苯胺0.5-100Y—0.000173+1.71449X0.9980.5
邻-甲基苯胺0.5-100Y-0.00110+144408X0.9980.4
2,4-二甲基苯胺0.5-100Y—-0.000231+1.32&77X0.9980.4
2,6-二甲基苯胺0.5-100Y—0.000506+1.02418X0.993 1.3
对-硝基苯胺0.5-100Y--0.000273+0.02767X0.99920.4
间-硝基苯胺1-200Y--0.000463+0.46946X0.99910.5
4-氯苯胺0.5-100Y--0.000410+0.02585X0.99910.5
3-氯苯胺0.5-100Y—-0.000741+1.14593X0.99940.4 N-亚硝基二苯胺0.5-100Y—-0.000382+1.15236X0.99920.6联苯胺0.5-100Y-0.00108+2.03995X0.99960.6
3,3-二氯联苯胺0.5-100Y—-0.000415+1.15572X0.99960.6
2.2精密度与准确度
平行测定加标浓度分别为20.0#•kgJ、20C#g •kg"和36C#g•kg"(以苯胺计)的空白石英砂6次，计算加标回收率和相对标准偏差。从表4中数据可知，加标回收率为77.5%〜124%，相对标准偏差为1.4%〜9.8%。
表415种苯胺类化合物在空白基质中的加标回收率
和相对标准偏差
化合物名称
空白加标浓度
(#g•kg1)加标回收率
(%)
相对标
差(％)
苯胺20,200,360117,114,100 5.0,&9,4.7邻-甲氧基苯胺20,200,360111,9&5,9&14,9.80,5.5 2-荼胺20,200,360111,9&0,91.7 3.5,&8,3.7对-甲基苯胺20,200,360124,121,114 1.4,&7,4.4
间-甲基苯胺20,200,360108,99.0,96.9 4.1,7.5,3.5
邻-甲基苯胺20,200,360112,102,92.2 3.4,7.2,4.9
2,4-二甲基苯胺20,200,3609&4,96.0,92.581,&3,5.7
2,6-二甲基苯胺20,200,360110,104,93.97.0,9.0,3.8
对-硝基苯胺20,200,360119,103,96.7 5.8,&9,4.8
间-硝基苯胺20,200,360108,99.5,90.8 2.4,6.1,5.0
4-氯苯胺20,200,360113,96.0,81.4 4.4,4.9,3.5
3-氯苯胺20,200,360123,107,97.2 5.2,&4,5.6 N-亚硝基二苯胺20,200,36095.8,87.5,77.5 3.0,5.9,5.1联苯胺20,200,360108,95.5,93.6 2.6,&7,4.7
3,3-二氯联苯胺20,200,360114,100,95.3 4.4,&7,5.1
2.3实际样品测定
为验证本方法在实际土壤样品测定中的可行性，本文对韶关市某地壤土和砂土2种土壤样品进行了分析测试。同时，分别对加标浓度为20.0#•kg1(以苯胺计)的壤土样品和加标浓度为36(#g•kg1(以苯胺计)的砂土样品进行6次平行测定。结果见表5。
由表5数据可知，壤土和砂土样品的加标回收率分别为80.0%〜121%和75.0%〜117%。结果表明，前处理过程对待测组分未造成明显的损失，能够满足实际土壤样品定量分析的准确性要求。
表5壤土和砂土土壤样品分析结果、加标回收率ND为未检出
化合物
壤土砂土
浓
#-kg1
加标浓度
#g-kg1
收浓
#g-kg1
收率
%
浓
#g-kg1
加标浓度
#g-kg1
收浓
#g-kg1
收率
%苯胺0.7620.020.8100 2.14360363100对-甲基苯胺ND20.020.3102ND36034896.7邻-甲氧基苯胺ND20.020.2101ND36031487.2间-甲基苯胺ND20.024.1121ND360420117邻-甲基苯胺ND20.020.5103ND360364101 2.4-二甲基苯胺0.7320.020.4984ND36029281.1
对-硝基苯胺ND20.017.889.00.7736028579.0间硝基苯胺ND20.0411103ND360562781 4-氯苯胺ND20.021.0105ND36033492.8 2-荼胺ND40.020.1101ND72034796.4 2.6-二甲基苯胺ND20.020.6103ND36028679.4
3-氯苯胺ND20.018793.5ND36030885.6 N-亚硝基二苯胺ND20.016.080.0ND36027075.0联苯胺ND20.019.597.5ND360320889 3.3-二氯联苯胺0.6820.021.2103ND36027576.4
3结语
本文选用超声提取—固相萃取—液相谱/三重四级杆质谱法测定土壤样品中的15种苯胺类化合物。实验结果表明，15种苯胺类化合物的方法检出限在0.4〜1.3“g•kg1之间，远低于建设用地土壤污染风险筛选值中第一类用地对苯胺($90mg/kg)和3，3-二氯联苯胺($1.3mg/kg)要求的标准限值-16.，能够满足土壤的要求。白标收率为77.5%〜124%，相对标准偏差为1.4%〜9.8%；对壤土和砂土2种土壤样品进行加标测试，其回收率分别为80.0%〜121%和75.0%〜117%，方法具有良好的重复性和再现性。综上所述，该方法具有抗干扰能力强、定量分析灵敏度高的特点，方法精密度和准确度均能满足土壤环境监测需要，适合土壤样品中多种苯胺类化合物的定。
参考文献：
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(2):86-89
《湖北农机化$021年第3期
裘鑫
(河北省顺平县农业农村局，河北保定072250)
摘要：苹果树作为一种常见且优质的果树品种，在我国有着悠久的种植历史，是一种较好的经济作物。苹果的营养丰富，富含多种矿物质和维生素，深受人们的喜爱&当前人们对于优质苹果的需求量比较高。为提高种植质量，现阶段的种植背景下，还需关注苹果的栽培技术和栽培管理方式的创新，促进苹果高产、优质。基于此，文章对苹果栽培技术要点进行了分析和探究&
关键词：苹果栽培技术；要点；探讨
0引言dota重金属
苹果树的适应能力和生命力比较强，在比较差的环境下能够较好地生存，但是要实现高产，还需要运用科学的栽培技术，同时提高其种植质量与苹果的口感，有效防控病虫害等。
1品种选择
苹果树的适应能力强，因此在北方各地分布广泛。区域差异影响着果树的栽培选择，具体种植过程中还应该结合区域实际，选择适合栽种的果树品种，保证后续种植过程中能获得高产。具体选择过程中要结合当地气候条件、土壤条件等选择合适品种，同时兼顾高产、耐旱等优势，为后续苹果的生长与高产奠定良好的基础。2土壤选择
为促进高产还应为苹果树的生长创设良好的土壤条件，可选择秋季进行土壤打理，改善土壤pH值，提高土壤肥力，为苹果后续的生长奠定基础。还应结合苹果树的根系进行挖穴，将定植点作为原心，穴规格的一半作为半径进行画圆，沿着圆的边线挖方形，之后施肥，覆土
3种植密度
苹果树的种植密度要进行合理控制，避免种植密度过于集中导致养分争夺的情况，或是种植密度过于分散造成空间资源浪费。苹果的种植密度比较高可能导致果树之间争夺光照、营养和水分，是不利于果树后期生长的。反之，种植密度过低，可能造成果园土地资源利用不充分，最终影响果树的产量。u盘移动办公系统
因此，若是想要促进苹果高产，一定要保证苹果种植密度的合理性，结合苹果品种去科学控制栽植密度。移栽前综合考虑果树的品质、产量、移栽效益等，单行密植效果最好。一般情况下，株行距在(0.8〜1.0)mX3.2m 之间比较合适，结合实际品种，还可适当扩大间距。
4提高苹果单质量的技术措施
为保证苹果单果实的质量，在果实膨长期间要注
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(收稿日期：2021-01-07)
《湖北农机化》2021年第3期
