一种围绝经期综合征的中药组合物及其制备方法与流程

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1.本发明具体涉及一种围绝经期综合征的中药组合物，同时还涉及该围绝经期综合征的中药组合物的制备方法，属于中药技术领域。

背景技术：

2.围绝经期综合征是困扰绝经前后妇女的一种常见疾病，出现潮热出汗、失眠心悸、头痛耳鸣、眩晕疲惫、焦虑易怒等以自主神经系统功能紊乱为主的症状。围绝经期综合征多发于40～60岁女性，其易诱发骨质疏松症、心血管疾病、抑郁症、老年痴呆症等多种疾病，严重影响患者身体健康。由于家族遗传、自身疾病、环境恶化等多种因素对围绝经期综合征的影响，围绝经期综合征发病率逐年升高。因此，对围绝经期综合征进行有效预防、，让广大女性自然、平稳、健康地度过围绝经期，具有重要的医学和社会意义。
3.目前，临床上常用激素替代法围绝经期综合征。长期使用具有耐药性，且易引发肥胖、头痛、乳房胀痛等不良反应，甚至存在致癌风险，导致乳腺癌、子宫内膜癌等疾病的发生。中药围绝经期综合征具有疗效好、毒副作用少、安全性高等优势，逐渐受到人们的关注。因此，应致力于寻较为理想的、安全有效的、价格适宜的，广大女性患者可接受的围绝经期综合征的中药新药。

技术实现要素：

4.本发明旨在提供一种疗效好、无毒副作用的围绝经期综合征的中药组合物。
5.本发明的另一目的在于提供该围绝经期综合征的药物的制备方法。
6.本发明的一种围绝经期综合征的中药组合物，其特征在于，由包含下列中药组分的药物制备而成：熟地黄8-10份；酒萸肉4-6份；泽泻3-8份；牡丹皮3-6份。
7.在上述方案的基础上，一种围绝经期综合征的中药组合物，优选由以下组分药物制备而成：熟地黄8份；酒萸肉4份；泽泻3份；牡丹皮3份。
8.本发明的一种围绝经期综合征的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：（1）按重量份取各原料药；（2）将上述原料药用8倍重量的水浸泡25-35 min，用武火煮沸后，再用文火煮25-35 min，取水煎液；药渣再加入6倍的水继续煎煮，煎煮25-35 min，取水煎液；合并两次水煎液，趁热过滤，滤液浓缩至相对密度在20℃下为1.15~1.35的浓缩液，冷冻干燥，粉碎，即得。
9.本发明重用熟地黄滋阴补肾，益精填髓，为君药。酒萸肉补益肝肾，收敛固脱，为臣药。泽泻利水渗湿，化浊降脂，并能减熟地黄之滋腻；牡丹皮清热凉血，并制酒萸肉之温涩；二者配伍，共为佐药。四药合用，共奏滋阴补肾之功，从而达到围绝经期综合征的目的，且该中药组合物具有配方简单、价格低廉、无毒副作用的优点。
10.本发明的中药组合物配方科学严谨，制备方法简单，制备成本低，具有较大的临床应用价值。
11.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
12.图1 大鼠各阶段阴道脱落细胞观察（he染，
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100）a 动情前期；b 动情期；c 动情间期；d 动情后期图2 各组大鼠子宫组织病理形态（he染，
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100）a 青年对照组；b 模型组；c 低剂量组；d 中剂量组；e 高剂量组；f 阳组图3 各组大鼠卵巢组织病理形态（he染，
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100）a 青年对照组；b 模型组；c 低剂量组；d 中剂量组；e 高剂量组；f 阳组图4 各组大鼠阴道组织病理形态（he染，
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100）a 青年对照组；b 模型组；c 低剂量组；d 中剂量组；e 高剂量组；f 阳组。
具体实施例
13.以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
14.实施例1利用本发明实施例的方法制备中药组合物，具体如下：1实验材料熟地黄352 g、酒萸肉176 g、泽泻132 g、牡丹皮132 g，各饮片均购自于北京同仁堂店。
15.2实验方法将上述原料药用8倍重量的水浸泡25-35 min，用武火煮沸后，再用文火煮25-35 min，取水煎液；药渣再加入6倍的水继续煎煮，煎煮25-35 min，取水煎液；合并两次水煎液，趁热过滤，滤液浓缩至相对密度在20℃下为1.15~1.35的浓缩液，冷冻干燥，粉碎，即得。
16.实施例2本实施例中，对实施例1得到的中药组合物进行药效研究，具体如下：1实验材料1.1实验动物10月龄spf级雌性sprague dawley（sd）大鼠，购于中国食品药品检定研究院，许可证号：scxk（京）2017-0005；3月龄spf级雌性sprague dawley（sd）大鼠，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，许可证号：scxk（京）2019-0010；实验室合格证号scxk（津）2020-0003。
17.1.2实验药物与试剂戊酸雌二醇片购于德国拜耳医药保健有限公司；雌二醇（e2）试剂盒购于上海联硕生物科技有限公司、促卵泡生成素（fsh）试剂盒购于上海联硕生物科技有限公司、促黄体生成素（lh）试剂盒购于上海联硕生物科技有限公司；he染试剂盒购于北京索莱宝科技有限公司；中性树胶购于北京索莱宝科技有限公司；羧甲基纤维素钠（cmc-na）购于天津市光复精细化工研究所；生理盐水购于石家庄四药有限公司。
18.1.3实验仪器xs105型电子分析天平，法国mettler公司；3k15型冷冻高速离心机，美国sigma公司；infinite m200 pro型多功能酶标仪，瑞士tecan公司；asp200s自动真空组织脱水机德国leica公司；eg1150h自动生物组织包埋机，德国leica公司；rm2255切片机，德国leica公司；nikon ci-l显微镜，日本nikon公司；-80℃超低温保存箱，中国海尔公司。
19.2实验内容由于女性在围绝经期阶段卵巢功能逐渐衰退，血清e2浓度降低、lh和fsh浓度升高，子宫、卵巢、肾上腺萎缩，子宫、卵巢、阴道组织形态发生改变，因此，本实施例采用自然老化围绝经期综合征大鼠模型考察实施例1中的中药组合物对大鼠血清中e2、lh、fsh浓度，子宫、卵巢、肾上腺的脏器指数，子宫、卵巢、阴道组织形态的影响，以评价实施例1中的中药组合物干预围绝经期综合征的药效学作用。
20.2.1药物溶液配制实施例1中的低、中、高剂量中药组合物给药剂量分别为2.28 g/kg、4.56 g/kg、9.12 g/kg（各药体积10 ml/kg）。配制方法：用蒸馏水溶解，分别配制为浓度为228 mg/ml、456 mg/ml、912 mg/ml溶液，分别相当于临床剂量的4倍、8倍、16倍。
21.0.5%cmc-na溶液配制：称取cmc-na粉末约5 g均匀撒入约900 ml蒸馏水中，静置使其溶胀，溶胀平衡后加热使其沸腾，并不断搅拌直至cmc-na均匀溶解，加入蒸馏水定容至1000 ml，搅拌均匀，即得0.5%cmc-na溶液，置于4℃冰箱中保存备用。
22.戊酸雌二醇片给药剂量为0.2 mg/kg。配制方法：取适量戊酸雌二醇片（1 mg/粒），研磨成粉后，加入一定量0.5% cmc-na溶液研磨，配制成浓度0.02 mg/ml的戊酸雌二醇混悬液，相当于临床剂量的2倍。
23.2.2确认自然老化围绝经期大鼠模型成功：采用自然老化的围绝经期大鼠模型，以阴道上皮角化试验确认自然老化围绝经期大鼠模型是否成功。具体操作如下：将沾有生理盐水的细棉签伸入大鼠阴道0.5～1 cm，顺时针缓慢旋转四圈后取出，将其均匀涂抹于载玻片，自然晾干后用95%乙醇固定，对涂片进行he染，晾干后置于显微镜下观察大鼠阴道上皮细胞变化，观察动情周期。
24.青年大鼠完整动情周期包括4个阶段：动情前期：约8～12 h，椭圆形有核上皮细胞占多数，少量角化上皮细胞；动情期：约24～30 h，不规则片状角化上皮细胞占多数；动情后期：约24～30 h，有核、角化上皮细胞均存在，白细胞环绕于上皮细胞；动情间期：约48～72 h，大量白细胞分散存在。各阶段大鼠阴道脱落细胞的形态特点，见附录图1。
25.本研究购买的3月龄大鼠动情周期正常；购买的10月龄大鼠，饲养至13月龄时，经阴道涂片观察，呈现动情前期消失、动情期缩短、动情后期或间期延长等动情周期紊乱现象，确认自然老化围绝经期大鼠模型成功。
26.2.3分组与给药：将自然老化围绝经期模型大鼠随机分为5组，每组12只，分别为模型组、中药组合物低剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物高剂量组、阳戊酸雌二醇组，另取3月龄大鼠12只，为青年对照组。中药组合物低、中、高剂量组分别灌胃低、中、高三种浓度的中药组合物的药液，阳戊酸雌二醇组灌胃戊酸雌二醇混悬液，模型组与青年对照组灌胃蒸馏水，灌胃体积均为10 ml/kg，连续灌胃60天。
27.2.4药效指标检测
（1）血清中e2、lh、fsh浓度测定：末次给药后禁食不禁水12 h，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，血液置于干净ep管中，室温静置60 min，3500 r/min离心15 min，取上清液即为血清，置于-80℃冰箱中保存，采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清e2、lh、fsh浓度；（2）脏器指数测定组织形态：腹主动脉取血后取子宫、卵巢、阴道和肾上腺，其中子宫、卵巢和肾上腺用分析天平准确称重，用于计算脏器指数。
28.脏器指数=（脏器重量/体重）
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100 %子宫、卵巢、阴道用4%多聚甲醛固定，经脱水、包埋、脱蜡、切片、he染，于通风橱中晾干，放置于电子显微镜下，观察各组大鼠子宫、卵巢及阴道组织形态。
29.2.5统计学分析采用spss 25.0软件进行数据分析，以graphpad prism 8.0.1软件绘图，实验数据以表示。组间比较采用单因素方差分析（one-way anova），以p《0.05为差异有统计学意义。
30.2.6 实验结果2.6.1药物对自然老化围绝经期模型大鼠脏器指数的影响各组大鼠脏器指数结果见表1。
31.表1 各组大鼠脏器指数（，n=12）注：与青年对照组比较，
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p《0.05；与模型组比较，
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p《0.05由表1可知，与青年对照组比较，自然老化围绝经期综合征模型组大鼠卵巢指数、子宫指数、肾上腺指数均显著降低（p《0.05）；与模型组比较，试验中、高剂量组及戊酸雌二醇阳性组能显著提高自然老化围绝经期综合征模型组大鼠卵巢指数、子宫指数、肾上腺指数均显著升高，且有统计学意义（p《0.05）。
32.2.6.2药物对大鼠血清中e2、lh、fsh浓度的影响各组大鼠血清e2、lh、fsh浓度结果见表2。
33.表2各组大鼠血清e2、lh、fsh浓度（，n=12）
注：与青年对照组比较，
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p《0.05；与模型组比较，
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p《0.05由表2可知，与青年对照组比较，自然老化围绝经期综合征模型组血清e2浓度显著降低（p《0.05），血清lh和fsh浓度显著升高（p《0.05）。与模型组比较，试验中、高剂量组及戊酸雌二醇阳性组可显著升高自然老化围绝经期综合征模型大鼠血清e2浓度（p《0.05）；试验中、高剂量组及戊酸雌二醇阳性组显著降低自然老化围绝经期综合征模型大鼠血清lh浓度，且有统计学意义（p《0.05）；试验低、中、高剂量组及戊酸雌二醇阳性组显著降低自然老化围绝经期综合征模型大鼠血清fsh浓度，且有统计学意义（p《0.05）。
34.2.6.3药物对大鼠组织形态学的影响（1）药物对子宫组织形态学的影响各组大鼠子宫形态结果见附图2。
35.由附图2可知，青年对照组大鼠子宫内膜厚，腺腔大，腺体和血管丰富；模型组大鼠子宫内膜薄，可见大量嗜酸性粒细胞浸润；试验低、高剂量组子宫内膜腺体数量较少，血管不丰富；试验高剂量组和戊酸雌二醇阳性组大鼠子宫内膜较厚，腺体较丰富，见少量嗜酸性粒细胞浸润。
36.（2）药物对卵巢组织形态学的影响各组大鼠卵巢形态结果见附图3。
37.由附图3可知，青年对照组大鼠可见不同生长发育阶段的卵泡（初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡）及黄体，且卵泡和黄体数目较多；模型组大鼠卵巢中卵泡黄体较少，多见闭锁卵泡及大量的间质细胞；试验低、中、高剂量组卵巢中卵泡和黄体数目有不同程度变多，体积变大。
38.（3）药物对阴道组织形态学的影响各组大鼠阴道形态结果见附图4。
39.由附图4可知，青年对照组大鼠阴道复层扁平上皮细胞层结构清晰，数量和大小正常；模型组大鼠阴道黏膜萎缩，复层扁平上皮细胞层变薄；试验低剂量组与模型组无明显差异；试验中、高剂量组和戊酸雌二醇阳性组大鼠阴道复层扁平上皮层明显变厚，结构清晰。
40.通过药效学试验显示，本发明中药组合物可提高子宫、卵巢、肾上腺指数，改善子宫、卵巢、阴道病理形态，增加血清e2浓度、降低lh、fsh浓度，表明本发明中药组合物可缓解脏器萎缩，改善病理形态，调节血清性激素水平，发挥干预围绝经期综合征的作用。

技术特征：

1.一种围绝经期综合征的中药组合物，其特征在于，由包含下列中药组分的药物制备而成：熟地黄8-10份；酒萸肉4-6份；泽泻3-8份；牡丹皮3-6份。2.根据权利要求1所述的一种围绝经期综合征的中药组合物，其特征在于，由包含下列中药组分的药物制备而成：熟地黄8份；酒萸肉4份；泽泻3份；牡丹皮3份。3.根据权利要求1或2所述的一种围绝经期综合征的中药组合物，其制备方法包括以下步骤：（1）取权利要求1所述处方量的各原料药；（2）将上述原料药用8倍重量的水浸泡25-35 min，用武火煮沸后，再用文火煮25-35 min，取水煎液；药渣再加入6倍的水继续煎煮，煎煮25-35 min，取水煎液；合并两次水煎液，趁热过滤，滤液浓缩至相对密度在20℃下为1.15~1.35的浓缩液，冷冻干燥，粉碎，即得。

技术总结

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种围绝经期综合征的中药组合物及其制备方法。该中药组合物的各组成按照重量份数如下：熟地黄8-10份；酒萸肉4-6份；泽泻3-8份；牡丹皮3-6份。其制备方法是将各原料药用8倍重量的水浸泡25-35min，用武火煮沸后，再用文火煮25-35min，取水煎液；药渣再加入6倍的水继续煎煮，煎煮25-35min，取水煎液；合并两次水煎液，趁热过滤，滤液浓缩至相对密度在20℃下为1.15~1.35的浓缩液，冷冻干燥，粉碎，即得。本发明中药组合物具有滋阴补肾的功效，能够有效缓解围绝经期综合征的症状，具有广阔的市场开发与推广应用前景。广应用前景。