茶心医院检验科 检测项目技术操作标准程序规范文件 | 淀粉酶(α-AMY)测定 | 文件编号: 页 码:第1页 共5页 | ||||||||||||||||||
1 目的 为操作者提供标准操作规程 2 适用范围 只适用于此项目的操作 3 定义 无 4 测定原理和临床意义 4.1 测定原理 α-淀粉酶检测中使用一种新的底物2－氯－4－硝基苯－麦芽丙糖苷 （CNPG3）该底物直接与淀粉酶反应而不需辅酶，从底物中释放出2－氯－4－硝基苯（CNP）。405nm波长下监测吸光度的变化。吸光度变化速率与样本中淀粉酶活性成正 比。 4.2 临床意义 血清淀粉酶测定主要用于诊断急性胰腺炎，在急性发作期，AMY活性明显升高。尿淀粉酶在发病后 12 - 24小时也会升高。其他急性疾病，如溃疡病穿孔、急性腹膜炎、肠梗性胰腺炎、胰腺肿瘤以及流行腮腺炎、唾液腺化脓或腺管堵塞时，血清淀粉酶也会有所升高。而对于各种肝脏疾病、肝炎、肝硬化、肝脓肿、肝癌及胆囊炎等，则淀粉酶活性下降。 5 实验室条件 5.1实验室：生物工程有限公司生化实验室 5.2温湿度：温度：15-32℃，湿度：20-85% 6 标本要求 6.1标本种类 6.1.1检体种类：血清 6.1.2检体量： 最适量3 ml 最小量2 ml 6.1.3分析量： 最适量500μl 最小量200μl 6.1.4容器 ：普通隔离胶管（黄） 6.1.5采集条件：检查对象生活饮食处于正常状态，避免剧烈运动，避免精神紧张，一般采用空腹，紧急状态可不空腹。 6.2使用条件 6.2.1保存条件：血清：。4-25℃放置可稳定5天。 开瓶试剂，避光保存在2-8℃可放置12周，15-25℃中可放置4周。 6.2.2特殊容器：无 6.2.3预防措施：因为检体有感染的危险性，使用时必须戴手套，防止检体飞散污染环境和器具，应尽快处理。 6.3拒收标准：采血量不足、严重溶血、严重乳糜血等。 7 试剂 7、1购入试剂：
7.2 试剂配制:无需配制，开瓶即用，稳定至瓶标日期(无污染条件下）。 | ||||||||||||||||||||
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8 仪器 HITACHI 7180自动生化分析仪 8 校准 9.1校准品准备 9.1.1校准品：豪迈多项复合校准物；货号13160；1×5mL 9.1.2校准品配制： 1）器具要求：5mL干净的吸管/移液管1支，洗耳球一个 2）配制方法：将冻干的校准品取出，用吸管（校准专用）或移液管吸纯水（要求水质>15MΩ）5mL溶解，注意余下的水不得吹入瓶内，应在瓶壁停留15秒。将盖盖紧，轻轻颠倒5次，放置10分钟，再轻轻颠倒即可使用。将溶好的校准品进行分装，用双层封口膜封好，放入-20℃冰箱保存备用。 3）保存条件 容器：复溶后可分装到仪器样品杯中。 温度：冻干品2-8℃ 复溶品 <-20℃ 效期：未开瓶冻干品2-8℃，可在有效期内保持稳定；复溶品 <-20℃可稳定1个月。 4）标签：复溶后瓶上应标明溶解日期、品名、效期、配制人。 9.2校准 9.2..1校准频度：一般每周一次，如下列情况发生时，应进行一次校准： 1）改变试剂的批号。 2）仪器进行过一次大的维护或更换灯泡比杯等重要部件。 3）质控出现异常的趋势或偏移，或超出了实验规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别出纠正问题时。 9.2.2校准方法 线性校准 1）将分装好的校准品取出，放在室温自然溶解（约20分钟），待其完全溶解后轻轻颠倒6次即可。 2）将校准品放在校准位上进行校准。（详见仪器操作规程） 9.2.3校准判定：校准通过后应进行质控验证，若质控在规定的范围内，即可判定校准成功，若如果质控结果仍不在允许范围内，说明校准可能失败。 9.2.4异常处理：若校准失败，应对校准品、试剂、仪器等进行排查；若校准通过但质控失控，应对质控品、试剂、仪器进行排查。 9 精度管理 10.1质控物质 10.1.1 名称：正常复合质控血清，货号13951、13511；1×5mL 异常复合质控血清，货号13151、13512；1×5mL 10.1.2 品牌：豪迈 10.2质控物质的使用和配制： 10.2.1器具要求：5mL干净的吸管/移液管1支，洗耳球一个 10.2.2配制方法： 1）将冻干的质控品取出，用吸管（校准专用）或移液管吸纯水（水质>15MΩ）5mL溶解，注意余下的水不得吹入瓶内，应在瓶壁停留15秒。 2）将盖盖紧，轻轻颠倒5次，放置10分钟，再进行颠倒5次，并颠倒放置 10分钟，再颠倒5次，放置10分钟，轻轻颠倒即可使用。 3）将溶好的质控品放入4-8℃备用（可保存3天）。如果进行分装，用双层封口膜封好， | ||||||||||||||||||||
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放入-20℃冰箱保存备用（可保存1个月）。 4）标签：复溶后瓶上应标明溶解日期、品名、效期、配制人。氟塑料离心泵结构图 10.3测定周期：每日早开机后测定质控一次，午后测定一次质控。金属表面镜面处理 10.4保存方法：未开瓶的质控品于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定；复溶的质控品可放置在4-8℃保存3天；在≤-20℃可稳定1个月。 10.5质控操作方法： 10.5.1 将分装好的质控品取出，放在室温自然溶解（约20分钟），待完全溶解后，将 其 上下轻轻颠倒6次即可。 10.5.2把质控品放在质控位上做质控。（详见仪器操作规程） 10.6 质控规则：根据设定的靶值和标准差绘制Levey—Jennings控制图，一般采用 Westgard多规则质控方法电动刻字笔 ①1 2S 测定值超出±2S，这是警告规则，要求操作人员检查是否还符合以下其中任 一规则。 ②1 3S 质控值超出±3S，是失控规则，为随机误差。 ③2 2S 连续2次结果超出了同方向的 +2S或 -2S，是失控规则，为系统误差。 ④R 4S 一个质控值超出+2S，另外一个超出了-2S，是失控规则，为随机误差。 10连续10次质控值在一侧，是失控规则，为系统误差。 10.7 失控处理： 1） 核查所用检测试剂的质量，是否过期或失效；检查校准品是否失效；检查质控品是否失效；有无仪器维护不良；检查工作人员的操作是否正确；检查当日实验室内温度，湿度等环境因素是否异常；有无特殊影响试验结果的情况。 2） 针对查出的原因采取相应的纠正措施，并重新测定质控,如果质控结果仍不在允许范围内，应对检测仪器进行重新校准，必要时与仪器或试剂厂家联系，以得到技术支持。 3） 记录在案：将检查和修正过程详细记录在案；，操作者，组长签字。 10.8 数据记录及保存形式：质控图 （电子版），原始仪器打印记录应由审核者签字。 10 操作程序 11.1标本准备 11.1.1容器：普通隔离胶管（黄） 11.1.2标本核收：按项目分类，按规定进行标本审核。审核申请单与标本管的项目、姓名、 标本种类。如果标本不合格，应填写《不合格标本登记》。 11.1.3标本前处理： 1) 将标本编号，离心（血清一定要离好），离心3000转/分钟 10分钟，两遍。刘若仪 2) 将离心的标本进行检查，如血清不好，应重新离心，按号依次放入盘内，对号入座。标本要放正，以免碰针。 11.2操作程序 详见仪器操作规程 11.2.1开机前准备。 11.2.2清理数据。 11.2.3校准（必要时） 11.2.4做质控。 11.2.5输机。 11.2.6放标本。 11.2.7开始分析。 11.2.8数据传送 | ||||||||||||||||||||
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11.2.9试验完毕后维护工作。 11.2.10关机。 11.2.11保存标本 11.2.12登记并记录当日仪器的状况，并签字。 11.3仪器分析条件 分析方法：速率法 样品 + R1 37℃ 吸光度AⅠ 37℃ 吸光度AⅡ （3μl）（300μl） 2min 3min 根据△A=A2-A1 计算浓度。 11.4危险品管理： 11.5.1标本可能有感染性，因此检验需戴手套，轻拿轻放，避免标本溅洒污染。 11.5.2对废弃的标本及废液处理，必须遵守废弃物管理办法进行处理。 三爪卡盘结构11.5.3保护和安全的提示：标本均视为有潜在传染性。 11 计算： 方程式： AMY(U/L)= △A/min×K 理论K值 9018（比杯光径为1.0cm） TV×1000 K= ε×SV×L △A/min:每分钟平均吸光度的变化 ε:毫摩尔消光系数=11.2 mΜ-1 cm-1 TV:总反应体积(μl) SV:标本体积(μl) L:比杯光径（cm） 12 结果报告 13.1参考范围的种类： 13.1.1参考范围： 1） 血清血浆<220U/L ，尿液<1000U/L，24h尿:≤900 U/24h。 *建议各实验室建立自己的参考范围。 2） 年龄性别基准范围： 3） 设定依据：《α-淀粉酶测定试剂盒说明书》，北京豪迈生物工程有限公司.YZB/京0293-2009 。根据临床试验正常人的结果，经过统计学计算得来。 4） 影响因素（生理变动）： 5） 不确定因素：严重乳糜血 （乳糜血中的微脂肪颗粒能够导致大量的光反射和散射，严重的可导致整个光路被遮断，从而引起极大的测试误差）；严重溶血（溶血会导致测试血清的透光性差，影响测试。而且导致血球内的成分进入到血清中从而引起较大的测试误差）； 13.2异常结果处理 1) 复查范围：>8000 U/L超出此范围必须复查，用生理盐水稀释血清重测，结果乘以稀释倍数。 2) 危急值：** 建议实验室建立自己的危机值。 3) 异常结果的处理和：按《危急结果处理程序》、《报告单审核制度》进行处理。 13.3报告形式 报告样式：AMY ** U/L 13 性能检测 1) 线性 10-8000 U/L 2) 特异性 3) 精密度 批内udnCV<5%（高值）或CV<10%（低值） | ||
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4) 批间相对极差：CV<10% 5) 准确度 检测结果与其他方法基本一致。 14 影响因素 15 干扰物质：唾液和皮肤含α-淀粉酶，因此溅入唾液、接触皮肤可影响检测结果。 16 药物：不详 17 注意事项 1）用尿液作样本，样本体积减半或稀释一倍。 2）唾液和皮肤含淀粉酶，勿用嘴吸吸管，勿使皮肤接触试剂。 3）试剂中含有0.095%叠氮钠，请注意防护。 18 参考文献 1.WS/T124-1999《临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则》. 2. GB/T 26124-2011《临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求》. 3. 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第三版.中华人民共和国卫生部医政司编.南京：东南大学出版社，2006. 4.郑铁生，鄢盛恺.临床生物化学检验.第2版.北京：中国医药科技出版社，2010. 5.Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4th ed. Washington DC：AACC Press，1995. 编 写： 审 核： 批 准： 批准日期： 年 月 日 | ||
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