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1.1NGS实验室又叫高通量测序检测实验室.NGS是下一代测序技术〔Next Generation Sequencing〕即高通量测序技术的简称.高通量测序技术是对传 统Sanger测序〔称为一代测序技术〕革命性的改变,可同时对几十万到 几百万条核酸分子进行序列测定,同时高通量测序使得对一个物种的转 录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,也称为深度测序〔Deep sequencing〕. 1.2由于NGS技术对所检测的核酸模板进行大量扩增,容易出现实验室污染 导致检测结果准确性下降；另外NGS技术要求高、影响因素多,实验过 程处理不当易导致检测结果准确性下降或检测失败.因此临床基因扩增 检验实验室技术验收和标准化治理是NGS技术本身需要,也是在临床上 顺利应用该技术前提.
二、NGS实验室临床应用的根本条件
2.1必须拥有符合临检中央相关规定的标准NGS实验室.
2.2检测设备必须符合标准NGS实验室设置要求：高通量测序仪及配套效劳 器；高通量测序检测试剂盒；通用电脑；自动分析软件,实验室样本信 息治理系统等.
2.3检测人员必须通过专门的技能培训,并获得省级以上卫生计生行政部门 颁发的临床基因扩增检验技术上岗证书.NGS实验室必须建立严格的实 验室治理制度、建立标准化操作程序〔SOP〕、建立系列质量治理文件 等,保证实验室日常运行符合国家卫生部的要求,保证检测结果准确、 保证实验室卫生平安,保证实验室长期稳定运行.
2.4NGS临床应用必须在无菌无尘环境下进行操作.
三、NGS实验室建设根本要求折叠炕桌
3.1主体结构
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主体为彩钢板、铝合金型材.室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角 铝,从而解决容易
污染、积尘、不易清扫等问题.结构牢固,线条简明,美 观大方,密封性好.
3.2标准的各区分隔和气压调节
将检测过程分成试剂准备、样本制备、PCR扩增和高通量测序四个独立的实 验区.整个区域有一个整体缓冲走廊.每个独立实验区设置有缓冲区,同 时各区通过气压调节,使整个检测实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染 并降低扩增产物对人员和环境的污染.
可翻开缓冲区和PCR扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇 门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气.
教学扩音器3.3消毒
在每个实验区和缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用.在各 区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒.
3.4机械连锁不锈钢传递窗
试剂和标本通过机械连锁不锈钢〔不建议使用电子连锁方式〕传递窗传递, 保证试剂和标本
在传递过程中不受污染〔人物分流〕.
3.5地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好.便于进行清扫,耐腐 蚀.没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖〔至少800MMX800出水服务mm〕 接缝需要小于2mm.
3.6照明
灯具要选用净化灯具,能到达便于清洗、不积尘的特点.
3.7平面布局
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NGS实验室应根据自己的检验工程、所采用的检测技术平台和工作量来决定 分区的多少及各区域的空间大小,至少具体需要多少个区,同样是“个体化〞 的,以“工作有序、互不干扰、预防污染、报告及时〞作为根本原那么.
四、各工程实验室建设标准
管坯
产前筛查与产前诊断〔全基因组低拷贝测序技术〕
1.实验室平面图
图1:产前筛查与诊断实验室平面图
2.技术流程图
图2：产前筛查与诊断技术流程图
3.技术参数
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分区 | 压力 | 温度 | 相对湿度 | 照明 |
专用走廊 | 0Pa | 20-25℃ | 40%〜60% | 主实验室三300LX,其 余房间200〜300LX |
缓冲区 | +5Pa |
试剂准备室 | + 15Pa |
标本与文库制」 备区 | + 10Pa |
文库扩增与检 测区 | -5Pa |
测序区 | 取样装置-10Pa |
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4.分区功能
4.1试剂准备室
主要功能：在NGS过程中使用到的试剂的配制、分装和保存.
4.2标本与文库制备区
主要功能：血液处理、血浆制备、DNA提取、DNA片段化、DNA样品的纯化、 DNA浓度检测、末端修复、接头连接、构建样本的测序文库.
4.3文库扩增与检测区
主要功能：文库构建后的PCR扩增与纯化、文库浓度检测、文库的混合及混 合后的质检分析.
4.4测序区
主要功能：测序模板制备〔乳液PCR与磁珠富集回收〕、上机测序、数据分 析、报告审核及发放.
激光投影键盘
5.仪器配置
5.1试剂准备室
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主要仪器设备：加样器、冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋振荡器、 移液器、可移动紫外灯和超净工作台等.
5.2标本与文库制备区
主要仪器设备：冷冻离心机、微量台式离心机、掌上三管离心机、涡旋震荡 器、垂直混合仪、移液器、可移动紫外灯、生物平安柜、冰箱、托盘天平、 Qubit 2.0核酸定量仪、电脑〔可连接互联网〕、条形码打印机、普通打印 机、扫描、磁力架等.
5.3文库扩增与检测区
主要仪器设备：PCR仪、QPCR仪、Qubit2.0核酸定量仪、可移动紫外灯、超 净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、UPS、冰箱、移液器、磁 力架等.
5.4测序区
主要仪器设备：高通量测序仪、PC电脑、打印机、UPS、恒温金属浴、纯水 仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、超净工作台、可移动紫 外灯、磁力架、PCR仪等.
胚胎植入前遗传学诊断〔全基因组低拷贝测序〕
1.实验室平面图
