Vol. 35, No. 6Nov. 2019第35卷第6期
（2019 年 11 月）福建师范大学学报(自然科学版)Journal of Fujian Normal University ( Natural Science Edition )DOI ： 10. 12046/j. issn. 10(X)-5277. 2019. 06. 011文章编号：100()-52力(2019 )06-0075-06
傅雅娟▽，陈苏星-蔡少丽"2，林莉莉-林清强
（1.福建师范大学南方生物医学研究中心，福建 福州350117；弹簧铰链
2.福建师范大学生命科学学院，福建福州350117）
摘要：为研究环鸟甘酸-腺昔酸合成酶入核的机制，利用兔外周血B 细胞筛选抗人cGAS 蛋白单克隆抗 体.针对已三次免疫人cGAS （161-522）蛋白的新西兰兔，运用流式细胞术得到阳性效应B 细胞，在单管 里对单细胞裂解，得到总RNA，逆转录生成cDNA，两步巢式PCR 扩增同一个B 细胞来源的抗体重链和轻 链可变区序列，抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T 重组表达兔抗人cGAS 蛋白单克隆抗体并鉴定，获 得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS 蛋白单克隆抗体，ELISA 检测结果显示抗体飽效价达I : 10 00（）.
大灯随动转向
关键词：cGAS ；单细胞；B 细胞；抗体
煎蛋锅
中图分类号：Q511 文献标志码：A
webqqqPreparation of Rabbit Monoclonal Antibodies Against
游戏推广系统>外用贴剂Human cGAS Protein from Single Rabbit B Cell FU Ya-juan 1 2, CHEN Su-xing 1, CAI Shao-li 1 2, LIN Li-li 1, LIN Qing-qiang'(1. Southern Biomedical Research Center , Fujian Normal University , Fuzhou 350117, China ；
2. College of Life Sciences , Fujian Normal University , Ficzfiou 350117, China )Abstract : To investigate the mechanism how cyclic GMP-AMP synthase ( cGAS ) protein en tries into the nucleus , monoclonal antibodies against human cGAS protein from rabbit peripheral blood B cells were screened. The New Zealand rabbits have been immunized three times with human cGAS ( 161-522) fragment. Positive rabbit peripheral blood B cells were sorted by fluorescence-ac tivated cell sorting ( FACS). Single cell was lysis into individual PCR tubes , and its total RNA was obtained. With the cDNA as the template , the antibody paired heavy and light chain variable chtiins were amplified by two-step nested PCRs , the success rate of antibody gene amplification was greater than 80%. The antibodies expressed in 293T cells
were identified. We obtained a monoclonal antibody with better binding specificity. The ELISA assay showed the titer of the antibody was over 1:10 000.
Key words : cGAS ； single cell ； B cell ； antibody
兔单克隆抗体（mAb ）在药物和诊断方面都具有高亲和力和特异性的优点.兔单克隆抗体相较于 鼠抗和兔多抗而言，具有更广泛的抗体谱、免疫球蛋白结构简单、更高特异性和亲和力、易于人源化 等优点.目前，有多种方法可筛选兔单克隆抗体，例如交瘤细胞技术Z ：；噬菌体展示技术*5 ； B 细胞分选后基于PCR 技术筛选获得兔单抗2".然而，这些技术也有很多不足，如花费时间较长、 低效率等.近年来，随着单细胞技术的发展，兔单抗筛选技术也呈现新的发展，该技术能将单个B 细 胞的克隆扩增后，通过PCR 技术得到天然抗体的重链和轻链卜“.该技术最重要的优点就是筛选时 间短，保留重链和轻链的自然同源配对，并让抗体有产生特异性、亲和力成熟的过程.然而，单个B 收稿日期:2019-03-06 基金项目：福建省自然科学基金资助项目（2017J01621）；福建省中青年教师教育科研项目（JA15130）通信作者：林清强（1971-），男，高级实验师，研究方向为生化与分子生物学.qingqianglin@ fjnu. edu. cn
