牛俊丽;李吉楠;刘辉;潘龙;王建
连体滑雪服【摘 要】为研究四种不同反刍动物饲料添加剂对瘤胃体外发酵的影响，本试验采用体外产气法和批次培养法分析不同添加水平的（0、1、2、4 g/kg干物质）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis，BS）、活性酵母粉（Procreatin，PRO）、瘤胃发酵增强剂(FIB)和米曲霉（Aspergillusoryzae，AO）对体外发酵产气量及瘤胃发酵的影响。结果表明：（1）随着枯草芽孢杆菌添加剂量的增加，体外72 h累积产气量（GP72）、理论最大产气量（A）和产气曲线平滑度（B）有线性降低的趋势（0.05<P<0.1）；随着活性酵母粉添加剂量的增加，理论最大产气量呈二次方显著增加（P<0.05）；随着瘤胃发酵增强剂和米曲霉添加剂量的增加，其体外72 h累积产气量和理论最大产气量均呈线性增加（P<0.05）。（2）四种饲料添加剂均能显著提高饲料体外干物质降解率（P<0.05）。（3）随着枯草芽孢杆菌添加剂量的增加，戊酸浓度呈线性降低（P<0.05），活性酵母粉和米曲霉并未显著影响挥发性脂肪酸各组分的浓度，随着瘤胃发酵增强剂添加剂量的增加，丙酸、异丁酸、异戊酸和戊酸浓度与瘤胃发酵增强剂的添加量呈二次方关系（0.05<P<0.1）。本试验结果表明：在不对瘤胃发酵产
生负面影响的情况下，添加四种反刍动物饲料添加剂均能提高饲料36 h体外发酵营养物质降解率。%This experiment was designed to investigate the effects of four ruminant feed additives,Bacillus subtilis (BS),Procreatin(PRO,major ingredient was high-enriched live yeast),Aspergillusoryzaeculture(AO ) and Fibrase(FIB) (major ingredient was Aspergillusoryzae culture,Aspergillusniger culture and lactic acid yeast) on gas production (GP), diet digestibility, rumen fermentation of different doses of 0 (control),1,2,4 g/kg diet (DM basis) by in vitro gas produc-tion technology and in vitro batch fermentation methods.The result showed as follows:(1)Regarding to BS treatment,the GP72,A tended to linearly decrease with the increase of adding levels (0.05<P<0.1).For PRO,the parameter A quadrati-cally increased (P < 0.05).The addition of AO and FIB linearly increased the GP72 and A (P < 0.05).(2)Compared with the control,the IVDMD were significantly increased in all additives treatments(P<0.05).(3)The concentration of valerate tended to linearly decrease with the increase of BS adding levels,PRO and AO didn't affected the concentration of volatile fatty acids.Propionic,isobutyric acid,isovaleric acid and valerate cocentration showed a quadra
tic relationship with FIB (0.05 < P < 0.1).The results suggested that the four additives could increase the feed degradation rate with no effect on rumen fermentation.
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2015(000)008
【总页数】滚珠滑轨7页(P28-33,42)
【关键词】饲料添加剂;体外产气法;批次培养法;瘤胃发酵
【作 者】牛俊丽;李吉楠;刘辉;潘龙;王建
【作者单位】新疆农业大学动物科学学院，新疆乌鲁木齐 830052; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京海淀 100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京海淀 100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京海淀 100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京海淀 100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京海淀 100193
【正文语种】中 文
【中图分类】面包包装袋S816.7
饲用微生物又称益生菌或者竞争性细菌培养物，是一种能够提高动物生产性能、无毒无残留的新型饲料添加剂，已成为抗生素的理想替代品。邓露芳等（2009）认为饲用微生物作为一种微生物饲料添加物，可通过改善宿主体内和周边的微生物区系，而提高饲料营养价值和动物对饲料的利用率，降低宿主发病率、死亡率。饲用微生物不仅能改变瘤胃发酵模式，还能提高动物的生产性能。有研究报道，在反刍动物日粮中添加饲用微生物能够提高瘤胃和整个消化道干物质（DM）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和粗蛋白质（CP）的消化率，提高干物质采食量，提高奶牛的产奶量，改善奶品质，提高饲料转化率，且具有减缓热应激，改善奶牛体况的作用（黄帅等，2010；栾广春等，2008）。本试验旨在通过体外产气法和体外批次培养法研究不同添加水平的枯草芽孢杆菌、活性酵母粉、瘤胃发酵增强剂和米曲霉对体外发酵产气量及动力学参数、体外营养物质降解率、瘤胃发酵模式和瘤胃氮代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 供体动物饲养和瘤胃液的采集 北京中地种畜有限公司试验基地选取3头健康且装有永久性瘤胃瘘管的泌乳期荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体牛。奶牛每天饲喂 3 次（7∶00、13∶00 和 19∶00），自由饮水。于晨饲前1 h通过瘤胃瘘管采集3头奶牛瘤胃内容物，混合后装于保温瓶带回，用4层纱布过滤（过滤同时通入CO2），整个操作于39℃水浴中进行，操作尽量在最短时间内完成。
1.2 添加剂和试验日粮 四种反刍动物饲料添加剂分别为：枯草芽孢杆菌（BS），主要成分为特强产酶菌株、产酸菌株、肠道抗感染菌株，以及有益菌代谢产物，活菌数大于5×108cfu/g；活性酵母粉（PRO）一种粉料型高浓缩活性酵母，活性酵母数大于 1.5×1010cfu/g；瘤胃发酵增强剂（FIB），是一种米曲霉培养物、黑曲霉培养物和乳酸马科斯克鲁维酵母混合发酵产物；米曲霉（AO）为米曲霉和黑曲霉混合菌株，总孢子数量大于1.5×1010个/g。
试验所用饲料与供体动物饲喂的饲料一致，饲料原料粉碎并过2 mm筛，按照配方制成颗粒料，风干后备用。基础日粮组成和营养水平如表1所示。
表1 基础日粮组成和营养水平（干物质基础）注：（1）每千克预混料含维生素 A 2000000
IU，维生素 D 600000 IU，维生素 E 10800 mg，Fe 5500 mg，Cu 4080 mg，Mn 4989 mg，Zn 17500 mg，I 180 mg，Se 110 mg，Co 8805 mg；（2）产奶净能为计算值，其他为实测值。日粮组成 含量 营养水平 含量羊草/% 3.7 干物质/% 55.78苜蓿干草/% 28.4 粗蛋白质/% 16.67全株玉米青贮/% 26.7 粗脂肪/% 2.24玉米/% 22.6 中性洗涤纤维/% 44.18豆粕/% 11.8 酸性洗涤纤维/% 26.06全棉籽/% 5.1 粗灰分/% 7.74磷酸氢钙/% 0.6 钙/% 0.82食盐/% 0.5 磷/% 0.31预混料/% 0.6 产奶净能/（MJ/kg） 4.07
1.3 试验设计 试验一：体外产气试验，采用完全随机设计，3个添加水平的4种反刍动物饲料添加剂随机分为12个组，同时设不添加添加剂的空白对照组，每组4个重复。四种添加剂的添加水平均为 0、1、2、4 g/kg 日粮底物。 试验期为 72 h，重复发酵2期。
试验二：体外批次培养试验，每种饲料添加剂均采用4×4二因子设计，因子一为4种不同添加剂量，分别为 0、1、2、4 g/kg 日粮底物，因子二为不同发酵时间 6、12、24、36 h。 试验期为 36 h，重复发酵2期。
1.4 体外发酵 试验一体外产气装置采用AGRS-Ⅲ微生物发酵微量产气自动记录仪（AGRS）（沈英等，2007）。准确称取约0.5 g饲料样品于150 mL厌氧发酵瓶中，每个
瓶中分别加入相应种类和剂量的添加剂。接种时迅速向每个瓶中加入50 mL预热的液体培养基和25 mL经4层纱布过滤的新鲜瘤胃液，液体培养基采用Menke和Steingass（1988）的方法配制，并向瓶中持续通入CO25 s后，立即盖上瓶塞，并将每个发酵瓶与产气装置的每个传感器相连接，于39℃下连续培养72 h。
试验二体外发酵装置采用ANKOM Daisy II体外模拟发酵培养箱，选择10～40 μm尼龙布，采用热封的方法制成3 cm×6 cm的尼龙袋，105℃烘至恒重，并记录每个尼龙袋重量，向每个已知重量的尼龙袋中准确称取约0.5 g饲料。尼龙绳封口后放置于DaisyⅡIncubator培养箱消化罐中，每个罐放置26个袋子，平均放在消化罐的分隔板两侧，于 39 ℃下分别培养 6、12、24、36 h。
水带1.5 样品采集与制备 试验一在发酵72 h的过程实时记录产气量，72 h产气结束后，将发酵瓶放在冰水中终止发酵。
试验二在发酵 6、12、24、36 h 后分别从每个罐中取出4、6、8、8个尼龙袋和15 mL发酵液体，取样时间尽量短，取完后及时向罐中充CO2数十秒，把罐依次放入培养箱中继续培养。从每个罐中取出的尼龙袋用来测定可消化干物质（DMD）、NDF、ADF和 CP，收集
的发酵液用于氨态氮（NH3-N）和挥发性脂肪酸（VFA）的测定。
1.6 指标测定及方法
1.6.1 发酵产气指标的测定及产气动力学模型分析 通过AGRS-Ⅲ型64通路微生物发酵微量产气全自动记录装置与软件系统记录产气量。参照Groot等（1996）指数模型对不同日粮累积产气量数据进行非线性拟合。缝纫网
