doi:10.16736/jki41-1434/ts.2021.07.056
超高效液相谱-串联质谱法测定动物源性食品中地塞米松和甲硝唑
Determination of Dexamethasone and Metronidazole in Food of Animal Origin by UPLC-MS/MS
◎ 张辰辰1，程红艳2
（1.济宁市食品药品检验检测中心，山东 济宁 272000；
2.辰欣药业股份有限公司，山东 济宁 272000）
ZHANG Chenchen1, CHENG Hongyan2
胶黏剂搅拌机(1.Jining Center for Food and Drug Control, Jining 272000, China;
2.Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Jining 272000, China)
摘 要：目的：建立超高效液相谱-串联质谱法同时检测畜禽肉中地塞米松和甲硝唑的残留量的分析方
法。方法：样品经甲酸化乙腈溶液提取，经Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化后用Agilent Eclipse Plus C18柱（1.8μm，100 mm×2.1 mm）分离，以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱，电喷雾正、负离子模式电离，多反应监测（MRM）模式进行检测。结果：地塞米松和甲硝唑在0.2～10μg·kg-1范围内线性关系良好（r≥0.997）。方法定量限低于0.5μg·kg-1，在2.5 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1和10.0 ng·mL-1加标水平的回收率为89.3%～101.7%，RSD为0.9%～4.5%。结论：该方法快速、准确灵敏，可用于畜禽肉中地塞米松和甲硝唑的残留量分析。 关键词：超高效液相谱-串联质谱法；地塞米松；甲硝唑
Abstract：Objective: To establish an ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the simultaneous detection of dexamethasone and metronidazole residues in livestock and poultry meat. Method: The sample was extracted with formic acid acetonitrile solution, purified by Oasis PRiME HLB solid phase extraction column, and separated by Agilent Eclipse Plus C18 column (1.8μm, 100 mm×2.1 mm), and methanol-0.1% formic acid solution was used as the mobile phase for gradient Elution, ionization in electrospray positive and negative ion mode, multiple reaction monitoring (MRM) mode for detection. Results: Dexamethasone and metronidazole have a good linear relationship in the range of 0.2～10μg·kg-1 (r≥0.997). The limit of quantification of the method was less than 0.5μg·kg-1, and the recoveries at the spiked levels of 2.5
ng·mL-1, 5.0 ng·mL-1 and 10.0 ng·mL-1 were 89.3%～101.7%, and the RSD was 0.9%～4.5%. Conclusion: This method is rapid, accurate and sensitive, and can be used for the analysis of dexamethasone and metronidazole residues in livestock and poultry meat.
Keywords：UPLC-MS/MS; dexamethasone; metronidazole
中图分类号：TS207.5
在我国畜禽养殖业中抗生素滥用问题一直比较严重，滥用抗生素势必会导致其在畜禽体内残留，不仅会给动物性食品安全带来潜在隐患，更会对人类的健康、环境造成危害[1]。地塞米松和甲硝唑为常见的易
作者简介：张辰辰（1987—），女，硕士，工程师；研究方向为食品质量安全检测。
现代食品XIANDAISHIPIN
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/分析检测
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Analysis and Testing 残留兽药，长期食用此类药物残留的食品，会造成其在人体内蓄积，可能产生多种慢性疾病。
国内外食品中地塞米松和甲硝唑的检测方法较多，但都是单一检测其中的一种残留量[2-3]，且前处理方法繁琐，检测周期长，本文旨在建立一种可同时检测畜禽肉中地塞米松、甲硝唑的UPLC-MS/MS 法，可望用于畜禽肉中兽药的快速检测。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
Exion LC-triple quad 3500液质联用仪（美国SCIEX ）； 高速冷冻离心机（湖南湘仪）；全自动平行浓缩仪（美国Labtech ）；超纯水仪（美国Millipore ）；XSE 104天平（梅特勒-托利多国际贸易（中国）有限公司）。1.2 材料与试剂
试验所用样品购自超市及农贸市场。甲硝唑标准品（农业农村部产品质量标准研究中心，100 μg·mL -1，甲醇）、地塞米松标准品（农业农村部环境保护科研监测所，100 μg·mL -1，甲醇）；乙腈、甲醇（谱纯，美国Fisher ）；甲酸（分析纯，上海阿拉丁）；固相萃取柱（Waters Oasis HLB 3 mL/60 mg ）。
地塞米松、甲硝唑混合基质标准工作溶液：吸取地塞米松和甲硝唑标准溶液适量，加空白基质溶液制成1.0 ng·mL -1、2.5 ng·mL -1、5.0 ng·mL -1、10.0 ng·mL -1、20.0 ng·mL -1和50.0 ng·mL -1的混合基质标准工作溶液。1.3 谱和质谱条件
谱柱：Agilent Eclipse Plus C 18（1.8 μm ， 100 mm ×2.1 mm ）；流动相A ：0.1%甲酸水溶液（v/v ），流动相B ：甲醇（含0.1%甲酸），梯度洗脱：0～1 min ， 90%A ；1～6 min ，90%→5%A ；6～8 min ，5%A ； 8～8.1 min ，5%→90%A ；流速：0.3 mL·min -1，进样量：10 μL ，柱温：40 ℃。扫描模式：MRM ，ESI 正负离子同时扫描，电喷雾电压：5 500 V （+）/4 500 V （-）；雾化器压力：0.345 MPa ；气帘气压力：0.069 MPa ；离子源温度：550 ℃。喷雾气压力：50 psi ；辅助气压力：
50 psi 。在上述条件下优化去簇电压（DP ）和碰撞气能量（CE ），结果见表1。1.4 实验方法
在济宁本地超市及农贸市场进行采样，共计30份，包括猪肉、羊肉、鸡肉。样品通过粉碎机打碎成肉泥，冷藏待用。称取10.00 g 样品于50 mL 具塞离心管中，加80%乙腈溶液（含0.2%甲酸）10.0 mL ，涡旋混匀，8 000 r·min -1离心10 min ，取上清液待净化。取Oasis PRiME HLB 固相萃取柱，将上清液过固相萃取柱，弃去约1 mL 初滤液，收集后续滤液5.0 mL 于40 ℃水浴N 2流下吹干，加1.0 mL 初始流动相复溶，过0.22 μm 滤膜至进样瓶中，供上机分析。
2 结果与分析
2.1 提取方法的优化
本文选择乙腈水溶液为提取溶剂，考察了纯乙腈、80%乙腈、60%乙腈水溶液对样品提取效果的影响，结果显示80%乙腈溶液共提取物较少，响应值高。有文献报道[4]在乙腈中加入适量甲酸有利于样品中蛋白质沉淀，故考察了体积分数为0.05%、0.1%、0.2%、0.5%甲酸乙腈溶液的提取效果，结果显示以0.2%甲酸乙腈水溶液提取时各组分回收率较高，因此最终选择含0.2%甲酸的80%乙腈溶液为最终提取液。所得提取液利用PRiME HLB 固相萃取柱直接净化去磷脂，浓缩后检测分析。2.2 质谱条件的优化
试验采用50 ng·mL -1混合标准品溶液，依次用甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水溶液、0.1%甲酸甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相，用注射泵连续进样进行质谱条件的优化。分别在ESI -、ESI +两种模式下进行Q 1扫描，发现0.1%甲酸有利于增强离子强度，地塞米松形成[M+CH 3COO]-、甲硝唑形成[M-H]+，其m /z 分别为437.2、172.0。再对母离子进行碰撞诱导解离，优化去簇电压和碰撞电压，结果见表1。
表1 监测离子对优化参数表大豆油墨
化合物分子式母离子（m /z ）
子离子（m /z ）
去簇电压/V
碰撞电压/eV
地塞米松C 22H 29FO 5437.2361.0a -75-27391.0-75-17甲硝唑
C 6H 9N 3O 3
分离式行车记录仪172.0
81.9
a
5034127.9
50
20
注：“a ”为定量离子。
分析检测Analysis and Testing
密封油2.3 谱条件的优化
本文比较了甲醇、乙腈与含0.05%、0.1%和0.2%甲酸水溶液的水相体系对待测物峰型、灵敏度等方面的影响。结果发现流动相为甲醇体系且甲酸含量为0.1%时，定量离子的响应值及峰型最佳，故选择甲醇水体系（含0.1%甲酸）为流动相；并在此基础上优化梯度洗脱程序，使待测物出峰能够良好分离。
2.4 方法学验证
参照《实验室质量控制规范食品理化检测》（GB/T 27404—2008）对本方法线性、回收率、精密度和定量限进行了评价[5]。实验以空白样品基质提取液配制浓度1.0～50 ng·mL-1的混合标准品溶液，在上述优化的谱和质谱条件下，以峰面积为纵坐标，质量浓度（ng·mL-1）为横坐标，采用外标法绘制标准工作曲线，结果表明地塞米松和甲硝唑在0.2～10μg·kg-1范围内线性关系良好，r依次为0.9978和0.9991。以10倍信噪比计算定量限，二者定量限均低于0.5μg·kg-1，满足国家标准要求。选择两类阴性样品基质添加3个浓度水平（2.5 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1）的混标溶液，每个水平6个平行，考察方法的回收率和精密度，结果见表2。从表中可看出，两种组分在不同基质中的加标回收率为89.3%～101.7%，RSD为0.9%～4.5%。
表2 不同基质中地塞米松、甲硝唑回收率和精密度表（n=6）
基质待测物加标水平/ng·mL-1平均回收率/（%）RSD/（%）
猪肉地塞米松
2.591.41.9
5.092.63.4
10.0101.71.0甲硝唑
2.589.84.5
5.090.50.9
金折网10.095.92.7
鸡肉地塞米松
2.589.32.9
5.0100.91.5
10.092.82.4甲硝唑
2.598.0
3.1
5.094.11.5
10.0100.31.9
2.5 样品测定
采用本法测定了30批本地市售的畜禽肉（猪肉、羊肉、鸡肉3种基质，每种基质各10份），均未发现阳性样品。
3 结论
本研究采用了甲酸化乙腈溶液为提取液，并沉淀蛋白，所得上清液直接通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化去磷脂，流出液在N2流下吹干，加1.0 mL 初始流动相复溶，以ESI源正负同扫的离子化模式，
建立了多种畜禽肉中地塞米松、甲硝唑的UPLC-MS/ MS快速检测方法。该方法较国家标准方法前处理简便、分析时间短，可满足多种畜禽肉中地塞米松和甲硝唑残留量的同时检测。
参考文献
[1]周军，李红斌，李睿鸿.滥用抗生素对养猪业的危害及应对措施[J].当代畜禽养殖业，2011（6）：44-47.
[2]中华人民民共和国农业部.动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测液相谱-串联质谱法：农业部1031号公告-2-2008[S].北京：中国农业出版社，2008.
[3]国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.动物源性食品中硝基咪唑残留量检验方法：GB/T 21318—2007[S].北京：中国标准出版社，2007.
[4]曹丽丽，周鑫达，张爱芝，等.QuEChERS-超高效液相谱-大气压化学电离-串联质谱法测定多种动物源性食品中的地塞米松残留[J].食品安全质量检测学报，2020，11（15）：5080-5087.
[5]国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范食品理化检测：GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.
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