实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值
(1)原理：某些可以产生一种胞外蛋白水解酶(明胶酶)，能使明胶分解为氨基酸，使明胶失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。 (2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，22℃培养7d或更长时间，每天观察结果有无凝固。
(3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。 (4)应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化 吲哚试验(靛基质试验)
(1)原理：某些细菌具有氨酸酶，能分解蛋白胨水中的氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂(
对二甲氨基苯甲醛)后则形成红的玫瑰吲哚。
(2)培养基：蛋白胨水培养基。
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(3)方法：将待检菌接种于富含氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂，观察结果。
(4)结果：于两液面接触处出现红为阳性，无为阴性。 (5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。
硫化氢试验
(1)原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑沉淀物(硫化铁或硫化铅沉淀)。
(2)培养基：醋酸铅培养基。
(3)方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中，于35℃孵育24h -48h，观察有无黑沉淀出现。
(4)结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
(5)应用：主要用于鉴别肠杆菌科中属及种的鉴别，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪沙门菌等。
尿素分解试验
(1)原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。
(2)培养基：尿素培养基。
(3)方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃孵育18~24h小时观察结果。
(4)结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。
(5)应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。
苯丙氨酸脱氨酶试验
(1)原理：测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氨酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨后生成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿反应。
(2)培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。
(3)方法：将待检菌大量接种入苯丙氨酸琼脂培养基中，35℃孵育18~24h，滴加10%三氯化铁试剂3~4滴，自斜面上方流下。
(4)结果：有绿出现为阳性。应立即观察结果，延长反应时间会引起退。
(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。
氨基酸脱羧酶试验
(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶，能分解氨基酸使其脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
(2)培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。
(3)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸)脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸)，各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，每日观察结果。
(4)结果：对照管应为黄，若为溴甲酚紫指示剂，则测定管呈紫则为阳性，若测定管呈黄为阴性。若对照管呈现紫则试验无意义，不能做出判断。
(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。
碳源和氮源利用试验
是细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。
在枸橼酸盐培养基中，细菌只有利用枸橼酸盐作为碳源，分解生成碳酸钠使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿变为深蓝。
常用的试验方法有枸橼酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验。
枸橼酸盐利用试验
(1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。
(2)培养基：枸橼酸盐培养基。
(3)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。
(4)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基由淡蓝变蓝为阳性;不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基不变，仍为绿为阴性。
(5)应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌
属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性。
丙二酸盐利用试验
(1)原理：某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解生成碳酸钠，使培养基变碱
(2)培养基：丙二酸盐培养基。
(3)方法：将待检菌接种于丙二酸盐培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。
(4)结果：培养基由淡绿变为蓝为阳性。颜无变化为阴性。
(5)应用：肠杆菌科中属间及种的鉴定。克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性，其它各菌属均为阴性。
氧化酶试验
(1)原理：氧化酶(即细胞素氧化酶)，是细胞素氧化酶系统中的最终呼吸酶。具有氧化
酶的细菌，首先使细胞素C氧化，再由氧化型细胞素C再使对苯二胺氧化，生成有的醌类化合物。因此，本试验结果与细胞素C的存在有关。
(2)方法：
1)菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上。
2)滤纸法：取洁净滤纸一小块，蘸取菌少许，然后加试剂。
3)试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。
(3)结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫，为阳性。无为阴性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。
(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌和假单胞菌属的鉴别，前者阴性，而后者阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。
过氧化氢酶试验(触酶试验)
(1)原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。
(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3%过氧化氢数滴，立即观察结果。
染料助剂 (3)结果：若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。
(4)应用：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故该试验常用于革兰阳性球菌的初步分。
硝酸盐还原试验
(1)原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物;二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等;有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离
子态的铵;有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如沙雷菌属;有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。
双人雨披 (2)培养基：硝酸盐培养基。
(3)方法：将待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)(约0.1ml)加于试管内，立即观察结果。
(4)结果：出现红为阳性反应。若加入试剂后无颜反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性;②硝酸盐被还原为氨和氮等其他物质而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红则表明试验确实为阴性。若仍不产生红，表明试验为假阴性。
若要观察是否有氮气产生，可于培养基管内加1只小导管，有气泡产生，则表示有氮气生成。
(5)应用：本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌属均可产生氮气;有些厌氧菌如韦荣菌等试验也为阳性。
脂酶试验
(1)原理：有些细菌产生脂酶，可分解脂肪成游离的脂肪酸。在培养基中加入维多利亚蓝可与脂肪结合成为无化合物，如果脂肪被分解，则维多利亚蓝被释放出来，呈现深蓝。
(2)培养基：含维多利亚蓝的脂酶培养基。
(3)方法：将待检菌接种于含维多利亚蓝的脂酶培养基中，置37零点在线℃孵育24h，观察结果。
(4)结果：培养基变为深蓝者为阳性，阴性为无或粉红。
(5)应用：主要用于厌氧菌鉴定。在类杆菌中的中间类杆菌产生脂酶，其它类杆菌阴性;在芽孢梭菌属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也产生此酶，而其它梭菌为阴性。
卵磷脂酶试验
(1)原理：有的细菌产生卵磷脂酶(α-毒素)，经钙离子作用，能迅速分解卵磷脂，形成混浊沉淀状的甘油酯和水溶性磷酸胆碱。
(2)培养基：1%卵黄琼脂平板。
(3)方法：取待检菌划线接种或点种在卵黄琼脂平板上，置35℃孵育3~6h，观察结果。
(4)结果：3h后在菌落周围形成乳白混浊环，即为卵磷脂酶试验阳性，6h后该混浊圈可扩大到直径5~6mm。
(5)应用：该试验主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌和诺维梭菌为阳性，其他梭菌为阴性。蜡样芽孢杆菌亦为阳性。
凝固酶试验
(1)原理：凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是与细胞壁结合的凝聚因子，称结合凝固酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使其变为纤维蛋白，发生凝集，包围于细菌外面而凝聚成块，可用玻片法测出;另一种凝固酶是分泌至菌体外，称为游离凝固酶，它能使凝血酶原变成凝血酶类产物，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。
(2)方法：
①筷子消毒器玻片法：取兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片中央，用接种环取待检菌分别与血浆和盐水混合。
简易功放 ②试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并均匀，置37℃水浴3-4小时，每30min观察1次结果。
