MEF培养方法
DMEO(高糖，冰箱储存)10%；FBS（胎牛血清,，-20℃储存）90%；
L-谷氨酸盐（200mM；部分-20℃储存），溶解后仅能用10天；
解剖器械：剪刀、手术钳、外科手术刀（高压灭菌）；
75%乙醇；
95%乙醇；
种鼠
原代MEF分离：
PPPOE 协议
颈部脱臼处死怀孕母鼠，喷洒75%乙醇消毒；
电子签章生成 用手术钳和剪刀解剖取出子宫，不要让其接触无灭菌的区域；剪去子宫颈和血管，将子宫放入无菌PBS培养皿，将每个胚胎分开； 把一个胚胎放入无菌PBS培养皿；用手术钳把胚胎从子宫切口剥离出来，移去薄膜和脐带，用无菌PBS洗去胚胎上的血细胞；
把胚胎移入无菌PBS的新培养皿，用外科手术刀移去肝脾和肠（红造血组织），剪去头部。
（保留CNS或肝脏组织于1.5ml管内做DNA提取和基因型测定）
把胚胎移入EP管，用眼科剪把胚胎剪碎。每个胚胎加1-2ml胰酶，放入摇床37℃,15min。之后用10ml移液管吸取上清液至聚氨酯115ml离心管中。加5ml培养液，1000rpm，5min，吸去上清液，再加5ml培养液离心。每10cm培养皿培养一个胚胎，加10ml培养液。第二天换液。
做下个胚胎之前，用无菌水清洗手术器械，然后95%乙醇清洗，空气干燥。
传代：用PBS反复洗细胞两三次，加胰酶1~2ml，待细胞分离后加2倍的培养基中和离心，去上清，加培养基吹打，加入培养皿。 冻存：用PBS反复洗细胞两三次，加胰酶1~2ml，待细胞分离后加2奶浆柴胡倍的培养基中和离心，去上清，加1.8ml胎牛血清（FBS拔桩），再加0.2mlDMSO，混合吹打，吸取2ml分别加入2根冻存管中-80℃冻存，6~8h后移入液氮罐。
