中外医疗China &Foreign Medical
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Treatment
随着目前分子生物学技术的突飞猛进以及对恶性肿瘤发生的细胞分子水平研究的深入，从基因水平寻肾癌防治的新途径成为研究的热点。MicroRNAs (miRNAs )是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA ，其大小长约20~25个核苷酸。最近的研究[1]表明miRNA 参与各种各样的调节 途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡等。miRNA 在多种肿瘤中存在表达异常，可以发挥癌基因或抑癌基因作用，它已经显示出能抑制某些重要肿瘤相关基因表达，在肿瘤发生、发展、预后中扮演十分重要的角[2]。目前有关miR-218的研究报道不多,miR-218参与了很多肿瘤的发生、发展。该研究于2012年3月—2013年5月间通过检测microRNA-218 在肾透明细胞癌组织中的表达，分析其与临床病理之间的关系，探讨miR-218对肾透明细胞癌组织的影响，从而初步揭示miR-218在肾透明细胞癌中的生物学功能。报道如下。1资料与方法1.1标本收集 收集河南科技大学第一附属医院的46例肾细胞癌癌组织及30例癌旁≥3.0cm 正常肾组织作为对照组。所有组织标本均经病理学诊断确认为肾细胞癌。其中肾细胞癌中，低分化11例，中分化17例，高分化18例，根据TNM 分期，临床Ⅰ期21例，临床Ⅱ期13例，临床Ⅲ期8例临床Ⅳ期4例，有淋巴结转移的14例，无淋巴结转移的32例，患者年龄28~80岁，平均年龄53.6岁，其中男性31例，女性15例。1.2RNA 提取和qRT-PCR
选用美国Invotrogen 公司的RNA 提取试剂盒，抽提组织总RNA 。用紫外分光光度计于260和280nm 波长处测定RNA 提
MicroRNA-218(miR-218)在肾透明细胞癌中的
表达及临床意义
任小强张建国辛士永程涛
河南科技大学第一附属医院新区医院泌尿外科，河南洛阳471023
[摘要]目的研究miR-218在肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法收集2012年3月—2013年5月间在该院就诊的46例病理确诊为肾透明细胞癌组织和30例癌旁≥3.0cm 正常肾组织作为对照组，采用Realtime PCR 方法检测microRNA-218在肾透明细胞癌组织和癌旁≥3.0cm 正常肾组织的
表达，分析microRNA-218表达水平与肾透明细胞癌临床病理参数之间的关系。结果与对照组癌旁正常肾组织相比,miR-218在肾透明细胞癌组织的的表达明显降低(P <0.001)。同时,miR-218表达的降低与肿瘤的分期，转移和分化程度有密切关系。miR-218的表达与患者的年龄，性别，肿瘤位置及肿瘤大小无明显统计学意义。但是,miR-218的表达与肿瘤的转移(P =0.007)，肿瘤的T 分期(P =0.022)及肿瘤的分级(P =0.015)有统计学意义。结论miR-218在肾透明细胞癌中和肿瘤分期、分化、转移有着很大的相关性。miR-218在肾透明细胞癌组织呈下调表达，其可能成为肾细胞癌新的潜在的靶点及诊断预后的分子标志物。[关键词]肾透明细胞癌(RCCC);miR-218；侵袭；转移[中图分类号]R737.11[文献标识码]A [文章编号]1674-0742(2014)04(b )-0020-02
Expression of MicroRNA-218(miR-218)in Renal Clear Cell Carcinoma and Its Clinical Significance
REN Xiaoqiang ZHANG Jianguo XIN Shiyong CHENG Tao
Department of Urinary Surgery,Xinqu Hospital,The First Affiliated Hospital of Henan University of Science &Technology,Lu ⁃oyang,Henan Province,471023,China
[Abstract]Objective To investigate the expression of miR -218in renal clear cell carcinoma and its relationship with clinical pathology.Methods The renal clear cell carcinoma tissue of 46cases of patients diagnosed with renal clear cell carcinoma in our hospital from March,2012to May,2013were
selected and 30cases of normal renal tissues ≥3.0cm adjacent to carcinoma as the control group.Realtime PCR method was used to detect the expression of microRNA-218in renal clear cell carcinoma tissue and normal renal tissue ≥3.0cm adjacent to carcinoma.The relationship between the expression of microRNA-218and renal clear cell carcinoma clinicopathological parameters was analyzed.Results Compared with the control tissues,miR-218expression in the RCCC tissues was significantly lower (P <0.001).Moreover,low miR-218was closely associated with the stage,metastasis,and the grade of the tumor.The expression of miR-218with the patient's age and gender,tumor location and tumor size had no statistical significance.But the expression of miR-218with the tumor metastasis (P =0.007),tumor T staging (P =0.022)and tumor grade (P =0.015),had statistical significance.Conclusion MiR-218was strongly correlated to RCCC stage,tumor grade,tumor metastasis.MiR-218was low express in the tissues of RCCC ,it may be used as a potential therapeutic target ,a diagnostic biomarker and a prognostic predictor in patients with RCCC in future.
[Key words]Renal clear cell carcinoma (RCCC);miR-218;Invasion;Metastasis
[作者简介]任小强,(1978.4-)，男，河南洛阳人，硕士研究生，住院医师，研究方向：泌尿外科基础与临床研究，邮箱: 。
[通讯作者]张建国(1965.6-)，男，河南驻马店人，硕导，博士，主任医师，研
究方向：泌尿外科基础与临床研究，邮箱: 。
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取液的吸光度(D )值，检测RNA 纯度和浓度。用Invitrogen 公司NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis 和qRT-PCR Kits 进行加PolyA 尾巴和反转录。操作程序为将消化后RNA 10μL 、5×反转录缓冲液4μL 、25mmol/LMnCl22μL 、2mmol/L ATP 1μL 、Poly A Polymerase 0.4μL 、用DEPC 处理
后的无酶水补至20μL ,
放置37℃15min ，再取加Poly A 后RNA 8μL 、Annealing Buffer 1μL 、Universal RT Primer (25uM )3μL ,65℃孵育5min ，迅速冰浴2~10min ，短暂离心，继续向以上反应液中加入2xFirst Strand Buffer 10μL 、SuperScript ⅢRT/RNaseOut Enzyme mix 2μL 轻轻吸打混匀,50℃孵育50min 。反应结束后85℃保温5min 。
使用罗氏公司的7500型荧光定量PCR 仪，采用2-△△CT 法进
行数据的相对定量分析。RealTime 反应体系为:2x REALSYBR ⁃Mixture 10uL 、10umol/Lmir-218上游引物0.4μL 、10umol/Lmir-218下游引物0.4μL 、反转录产物2μL ，加入灭菌蒸馏水至20μL 。
扩增程序为:95℃10min ,(95℃15sec ,60℃60sec )×40个循环。以U6基因表达作为内参。miR-218的相对表达量通过公式2-△△CT 计算，其中ΔCt =miR-218Ct 值-U6Ct 值。1.3统计方法
采用SPSS17.0软件进行统计学分析。miR-218在肾细胞癌癌组织与癌旁正常肾组织的表达差异采用独立样本的t 检验。miR-218的表达与肾细胞癌临床病理学特征的关联采用非参数Mann Whitney U 检验。2结果
与对照组癌旁正常肾组织相比,miR-218在肾透明细胞癌组织的的表达明显降低，差异有统计学意义(P
<0.001，图A)。同时,miR-218表达的降低与肿瘤的分期，转移和分化程度有密切关
系(图B，图C ，图D)。miR-218的表达与患者的年龄(P =0.817)，性
别(P =0.951)，肿瘤位置(P =0.914)及肿瘤大小(P =0.354)差异无统计学意义。但是,miR-218的表达与肿瘤的转移，差异有统计学意义
(P =0.007)，肿瘤的T 分期，差异有统计学意义(P =0.022)及肿瘤的分级，差异有统计学意义(P =0.015)，见表1。
表1肾癌组织及癌旁正常肾组织中miR-218表达差异
注:miR-218低表达(T/N<1.2)；中(T/N=1.2-10)；高(T/N>10)。
3讨论
肿瘤的侵袭和转移仍是肿瘤高死亡率的主要原因。在最新的一些研究报告中,MiR -218可以抑制肿瘤的进展和侵袭，可以明显降低人类恶性肿瘤发生[3]秸秆腐熟剂>缘114
。然而,miR-218在肾癌中的作用尚未进一步的研究。
该研究发现,MiR-218在肾透明细胞癌组织中的表达是减少的，明显低于对照组(P <0.001)，尤其是在肿瘤晚期，表达明显降低，显示出它在肿瘤进展与侵袭中的作用更加突出。miR-218在肾癌中的这种现象符合之前的研究报道[4-6]。此外，在肿瘤组中,miR-218在晚期肾透明细胞癌组织中的表达水平明显低于早期肾透明细胞癌(P <0.001)。低分化肾透明细胞癌中miR-218的表达水平明显低于高/中分化肾透明细胞癌(P <0.05)，有淋巴结转移的肾透明细胞癌组织中miR-218显示明显低表达(P <0.001)。由于miR-218已经被证明在宫颈腺癌以及许多其他恶性肿瘤中
与肿瘤的转移及侵袭明显相关[7-8]，而该研究进一步显示miR-218在肾恶性肿瘤的转移及侵袭中也可能是一个重要的因素[9]。综上，研究发现,miR-218在肾细胞癌组织中与分期、分化、转移是有密切关系的，其表达水平与临床进展呈负相关,miR-
218在肾细胞癌中作为一个肿瘤抑制基因，揭示了其可能成为肾癌新的潜在的靶点。
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(收稿日期:2014-01-05)
肾癌组对照组
指标4630
金属槽筒
例数163
低2111
中9
160.030
高
P MiR-218表达
注:A:miR-218在癌旁正常肾组织及肾癌组织中的表达;B：为miR-218在早期及晚期肾癌组织的表达C:miR-218在分化程度良好及分化程度较低肾癌组织的表达D：为miR-218在有转移及无转移肾癌组织中的表达。
图1
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铝合金去毛刺机
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