1.本发明涉及植物化学技术领域，尤其涉及一种青葙子
化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
2.青葙子为苋科植物青葙celosia argentea l的干燥成熟种子，味苦，微寒，归肝经。功能与主治为：清肝泻火，明目退翳；用于肝热目赤，目生翳膜，视物昏花，肝火眩晕。青葙子资源广泛分布于热带和温带地区，主产区为亚洲和非洲热带地区，在我国几乎遍及全国各地。
3.近年来科学家对青葙子的化学成分开展了系统的研究，先后发现了青葙苷 a（celosina）、青葙苷 b（celosin b）、青葙苷 c1（celosin c1）、青葙苷 d1（celosin d1）、青葙苷 e（celosin e）、青葙苷 f（celosin f）、青葙苷g（celosin g）、青葙苷h（celosin h）、青葙苷i（celosin i）、青葙苷l（celosin l）、鸡冠花苷（cristatain）等系列特征性成分，并开展了现代药理学研究，青葙子具有保肝、抗肿瘤、抗糖尿病等作用，对脂肪肝、化学性肝损伤等亦具有很好的防治作用；青葙子
乙醇提取物具有退热、解痉、抗炎和抗菌活性。
4.随着现代分离、分析、结构鉴定技术、活性评价技术的不断发展，对中药资源青葙子的化学成分及其活性的研究开发依然需要深度的持续性开展，以期获得更多更有价值的化合物，为新药开发开创新的机遇。
技术实现要素：
5.为解决现有技术不足，本发明提供一种青葙子化合物及其制备方法和应用，可以获取新的化合物，分离纯化该化合物的方法简单。
6.为了实现本发明的目的，拟采用以下方案：一种青葙子化合物，名称为贝萼皂苷元-3-o-[β-d-吡喃葡萄糖-（1
→
3）-β-d-吡喃葡萄糖醛酸]-28-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，自命名为celosin l8，化学结构式如下：进一步的，白固体，电喷雾电离质谱esi-ms显示:正离子1011.17[m+na]
+
，负离
子987.51[m-h]-，分子式为c
48 h
76 o
21
。
[0007]
一种青葙子化合物的制备方法，如下：s1、将青葙子粉碎，用30%-65%
甲醇浸泡12-36h后，再用30%-65%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱
层析，依次用水、不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷；s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于40-60℃减压浓缩至浸膏；s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.20-0.50μm滤膜过滤,比如0.22μm或者0.45μm的滤膜，滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）。
[0008]
进一步的，步骤s1中，将青葙子粉碎，用60%甲醇浸泡24h后，再用60%甲醇渗滤。
[0009]
进一步的，步骤s1中，浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液。
[0010]
青葙子化合物在制备疾病防治药物中的应用，所述疾病包括肿瘤、糖尿病、脂肪肝、化学性肝损伤中一种或多种。
[0011]
进一步的，青葙子化合物配以药用辅料以及药学上或生理学上的载体，用于制备任何一种剂型。
[0012]
本发明的有益效果在于：发现一种新的青葙子化合物（celosin l8），且分离纯化该青葙子化合物的方法简单。该青葙子化合物具有显著抗肿瘤活性的功能，可用于制备抗肿瘤药物。
具体实施方式
[0013]
实施例1一种青葙子化合物的制备方法，具体实施方式为：s1、将青葙子粉碎，用65%甲醇浸泡36h后，再用65%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷。
[0014]
s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于60℃减压浓缩至浸膏。
[0015]
s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.50μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）。
[0016]
实施例2一种青葙子化合物的制备方法，具体实施方式为：s1、将青葙子粉碎，用60%甲醇浸泡12h后，再用30%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷。
[0017]
s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于40℃减压浓缩至浸膏。
[0018]
s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.40μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）。
[0019]
实施例3一种青葙子化合物的制备方法，具体实施方式为：s1、将30kg青葙子粉碎，用30%甲醇浸泡24h后，再用30%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷456g；s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于50℃减压浓缩至浸膏28g；s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.45μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）为36mg。
[0020]
实施例4一种青葙子化合物的制备方法，具体实施方式为：s1、将30kg青葙子粉碎，用60%甲醇浸泡24h后，再用60%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷658g；s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于50℃减压浓缩至浸膏96g；s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.45μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）为470mg。
[0021]
实施例5一种青葙子化合物的制备方法，具体实施方式为：s1、将30kg青葙子粉碎，直接用60%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷235g；s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于50℃减压浓缩至浸膏35g；s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.45μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物（celosin l8）为150mg。
[0022]
综上，分离纯化该青葙子化合物的方法简单，而且用60%甲醇浸泡24h后，再用60%甲醇渗滤，这一步骤非常重要，可以从30kg青葙子提取出470mg青葙子化合物。
[0023]
采用核磁二维技术进行结构鉴定青葙子化合物（celosin l8）为白固体，化学结构式如下：青葙子化合物（celosin l8）的电喷雾电离质谱esi-ms显示:正离子1011.17[m+na]
+
，负离子987.51[m-h]-，分子式为c
48 h
76 o
21
，化合物分子量为988。
[0024]
表1青葙子化合物（celosin l8）数据归属(c5d5n，tms， δppm，j=hz)
表1的h谱与c谱可以推断该化合物为五环三萜皂苷类化合物。从氢谱上看，6个甲基取代基，δh 0.84，0.85，1.15，1.21，1.35，1.56 (each 3h, s);δh 5.39 (1h, t, j=4.0), 为双键氢上的质子信号；δh 5.18 (1h, d, j=8.0), 5.28 (1h, d, j=8.0)，6.31 (1h, d, j=8.5)为糖的端基氢信号，说明该化合物具有3个糖单元。通过hsqc对其进行碳氢全归属，由hmbc发现δh 5.28 (h-1’)与δc 82.0 (c-3)相关，说明糖单元是连接在c-3上面，同时δh 5.18(h-1
’’
)与δc 81.5 (c-3’)相关，说明另外一个糖是与c-3’相连。除此之外，δh 6.31 (h-1
’’’
)与δc 171.6 (c-28)相关，说明第三个糖单元是连接在c-28上；结合hhcosy，δh 4.51(h-3’)与4.21(h-4’)相关。在13cnmr中，第三个糖的化学位移与文献报道的半乳糖进行比较，有两个碳的化学位移向低场移动，与葡萄糖较吻合，说明第三个糖为葡萄糖，其中，文献报道指的li,d.,liu,d.,lv,m.,gao,p.,liu, x.,isolation of triterpenoid saponins from medicago sativa l. with neuroprotective activities, bioorganic &medicinal chemistry letters (2020),doi:https://doi .org/10.1016/j.bmcl.2020.126956。
[0025]
综上所述，该化合物鉴定为，贝萼皂苷元-3-o-[β-d-吡喃葡萄糖-（1
→
3）-β-d-吡喃葡萄糖醛酸]-28-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，为新化合物。
[0026]
实施例6青葙子化合物（celosin l8）体外抗肿瘤活性试验。
[0027]
测试青葙子化合物（celosin l8）对人肝癌hepg2细胞、人乳腺鳞状癌mcf-7细胞和hcc1086细胞、人宫颈癌h460细胞和a549细胞、人胃癌mgc-803细胞、人肠癌hct116细胞、人胶质瘤shg44细胞、人白血病cem细胞的抑制效果。
[0028]
采用mtt法，以顺铂为阳性对照药。取对数生长期的hepg2、mcf-7、hcc1086、h460、a549、mgc-803、hct116、shg44、cem细胞，加无血清培养基调整细胞浓度为 5
×
104/ml， 接种于 96 孔培养板，每孔200 μl，37 ℃、5% co
2 培养 12 小时，吸出培养基，取 20 mg/ml wm-ac dmso 溶液，加无血清培养基稀释后加新化合物和顺铂药物（6.25、12.5、25、50、100 μg/ml）， 每个浓度设置 3 个复孔。继续培养 24 小时，吸出含药培养基，每孔加入无血清培养基 100 μl、5 mg/ml。取新化合物配置成（100、10、1、0.1、0.01、0.001 μg/ml）。
[0029]
mtt溶液 20 μl，培养箱中孵育4 小时，弃去培养基，每孔加100 μl dmso 充分震荡后，570 nm 处读取吸光度（a）值，所有化合物每个浓度均平行测试3次，计算被测药物对肿瘤细胞的抑制率。
[0030]
采用非线性回归模型绘制s型剂量效应曲线，用originpro 软件计算半数抑制浓度（ic
50
）值。
[0031]
抑制率＝（a
对照
－a
给药
）/a
对照
lgic
50
＝xm－i[p－（3－pm－pn）/4]xm为lg最大剂量；i为 lg（最大剂量/相邻剂量）；p为抑制率之和；pm为最大抑制率；pn为最小抑制率。
[0032] 青葙子化合物（celosin l8）的体外抗肿瘤活性结果见表2，根据试验结果可以看到，青葙子化合物（celosin l8）对人肝癌hepg2细胞、人乳腺鳞状癌mcf-7细胞和hcc1086细胞、人宫颈癌h460细胞和a549细胞、人胃癌mgc-803细胞、人肠癌hct116细胞、人胶质瘤shg44细胞、人白血病cem细胞的均表现出较强的抑制作用，其中对hcc1086细胞和人胶质瘤shg44细胞的抑制效果强于阳顺铂。
[0033]
表2 青葙子化合物（celosin l8）对肿瘤细胞的抑制作用青葙子化合物（celosin l8）可用于制备肿瘤、糖尿病、脂肪肝、化学性肝损伤等疾病防治药物。青葙子化合物（celosin l8）配以药用辅料以及药学上或生理学上可接受的载
体，以常规制备工艺制备成药剂学上任何一种剂型。
[0034]
以上实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，并不表示是唯一的或是限制本发明。本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的范围情况下，对本发明进行的各种改变或同等替换，均属于本发明保护的范围。
技术特征：
1.一种青葙子化合物，其特征在于，名称为贝萼皂苷元-3-o-[β-d-吡喃葡萄糖-（1
→
3）-β-d-吡喃葡萄糖醛酸]-28-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，自命名为celosin l8，化学结构式如下： 。2.权利要求1所述青葙子化合物，其特征在于，白固体，电喷雾电离质谱esi-ms显示:正离子1011.17[m+na]
+
，负离子987.51[m-h]-，分子式为c
48 h
76 o
21
。3.一种如权利要求1或2所述的青葙子化合物的制备方法，其特征在于，如下：s1、将青葙子粉碎，用30%-65%甲醇浸泡12-36h后，再用30%-65%甲醇渗滤，过滤合并提取液，减压浓缩得浓缩液；浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥，得青葙子总皂苷；s2、将所得青葙子总皂苷用甲醇分散,用青葙子总皂苷质量的2-3倍硅胶拌样,所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析,以10-20倍的硅胶为填料,湿法装柱,干法上样,用二氯甲烷-甲醇溶剂体系为洗脱剂进行常压洗脱,分段收集，根据薄层层析结果,将含有目标化合物的收集液合并，于40-60℃减压浓缩至浸膏；s3、将所得的浸膏用甲醇分散,再用0.20-0.50μm滤膜过滤,滤液再经c18反相谱系统制备分离，即得青葙子化合物。4.根据权利要求3所述的青葙子化合物的制备方法，其特征在于，步骤s1中，将青葙子粉碎，用60%甲醇浸泡24h后，再用60%甲醇渗滤。5.根据权利要求3所述的青葙子化合物的制备方法，其特征在于，步骤s1中，浓缩液通过ab-8大孔树脂柱层析，依次用水、30%乙醇和95 %乙醇梯度洗脱，收集95 %的乙醇洗脱液。6.根据权利要求1所述青葙子化合物的应用，其特征在于，在制备疾病防治药物中的应用，所述疾病包括肿瘤、糖尿病、脂肪肝、化学性肝损伤中一种或多种。7.根据权利要求6所述的青葙子化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，青葙子化合物配以药用辅料以及药学上或生理学上的载体，用于制备任何一种剂型。
技术总结
本发明公开了一种青葙子化合物及其制备方法和应用，属于植物化学技术领域，青葙子化合物名称为贝萼皂苷元-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖-（1
技术研发人员：
朱海洋 陈冲 徐仕银 钟朝润
受保护的技术使用者：
成都乐美天医药科技有限公司
技术研发日：
2022.07.12
技术公布日：
2022/11/25
