一种喜树种子发芽方法

一种喜树种子发芽方法

技术领域

本发明属于植物生理生态学和植物化学研究领域，具体涉及一种喜树种子发芽方法。

背景技术

喜树（Camptotheca acuminata Dence）为国家Ⅱ级重点保护野生植物，其全株均含有一种吲哚类生物碱—喜树碱，而以果实和叶片含量为高。喜树碱具有显著抗肿瘤活性，全球对喜树碱类抗肿瘤药品的需求逐年增加，目前市场份额已超过10亿美元。由于目前尚无人工合成产品可取代喜树碱，喜树碱必须从喜树中分离、纯化获得，因而野生喜树资源面临巨大压力。自从喜树成为抗癌药的原料植物以来，其野生资源分布呈明显递减趋势。

为了缓解喜树资源危机，亟需开展喜树人工林培育。在培育喜树苗木时，通常要先进行发芽后，再进行播种。植物种子的发芽率高、发芽势强，预示着出苗快而整齐，苗壮；若发芽率高、发芽势弱，预示着出苗不齐、弱苗多。因此，在喜树种子相同的情况下，通过简单的方法提高喜树种子的发芽率和发芽势将是获得喜树壮苗途径之一。同时，提高喜树种子发芽率也可以减少育苗用种量，降低成本。本发明旨在提供一种提高喜树种子发芽率和发芽势的方法。

目前，促进植物种子发芽的方法包括温水浸种、有机溶剂渗透法、渗透调节法、机械处理、层积处理、物理场处理（电场、磁场、超声波、红外线）等。南方红豆杉拉丁学名Taxus chinensis (Pilger) Rehd.，系红豆属一种针叶树种。本发明提供的方法系利用南方红豆杉枝叶提取物浸泡喜树种子以提高其发芽率和发芽势，因此与上述方法均不同。

发明内容

本发明提供的喜树种子发芽的方法，其特征在于，按如下步骤操作：

(1) 将南方红豆杉树叶干燥、粉碎得到粉末Ⅰ，甲醇与粉末Ⅰ按质量比5：1～10：1混合、回流提取1～3小时，过滤提取液，滤液浓缩至干，得到固形物Ⅱ；

(2) 将步骤(1)得到的固形物Ⅱ与水按质量比1：100～1：1000混合，超声处理5～10分钟，得到固形物Ⅱ悬浊液；

(3) 用步骤(2)得到的固形物Ⅱ悬浊液浸泡喜树种子，浸泡温度25～35℃，浸泡时间12～36小时；

(4) 在培养皿内铺四层用水润湿的滤纸，将按步骤(3)处理后的喜树种子放在滤纸上，盖上培养皿盖，培养皿置入培养箱中进行发芽，至培养皿放入培养箱后的第9～12天，终止发芽。

用本发明提供的方法进行喜树种子发芽，其发芽率和发芽势均明显增加，同时，发芽高峰日也会提前。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行进一步描述。

实施例1

本实施例中喜树种子采自四川。喜树种子发芽的操作步骤如下：

(1) 取南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到490克粉末Ⅰ，甲醇与粉末Ⅰ按质量比5：1混合、回流提取2小时，过滤提取液，滤液浓缩至干，得到82克固形物Ⅱ；

(2) 将步骤(1)得到的82克固形物Ⅱ与水按质量比1：500混合，超声处理8分钟，得到固形物Ⅱ悬浊液；

(3) 用步骤(2)得到的固形物Ⅱ悬浊液浸泡喜树种子，浸泡温度25℃，浸泡时间24小时；

(4) 在培养皿内铺四层用水润湿的滤纸，将按步骤(3)处理后的喜树种子放在滤纸上，盖上培养皿盖，培养皿置入培养箱中进行发芽，至培养皿放入培养箱后的第9天，终止发芽。

用蒸馏水代替固形物Ⅱ悬浊液，只进行本实施例操作步骤中的步骤(3)和步骤(4)，以此作为对照处理，进行喜树种子发芽。统计分析结果表明本实施例喜树发芽高峰日为浸种后第6天，发芽势为58.6%，发芽率为79.6%；对照喜树发芽高峰日为浸种后第8天，发芽势为23.3%，发芽率为62.9%，说明本实施例提供的方法，喜树种子的发芽势和发芽率均明显提高，同时发芽高峰日也提前了2天。

实施例2

本实施例中喜树种子采自贵州。喜树种子发芽的操作步骤如下：

(1) 取南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到260克粉末Ⅰ，甲醇与粉末Ⅰ按质量比8：1混合、回流提取3小时，过滤提取液，滤液浓缩至干，得到46克固形物Ⅱ；

(2) 将步骤(1)得到的46克固形物Ⅱ与水按质量比1：100混合，超声处理5分钟，得到固形物Ⅱ悬浊液；

(3) 用步骤(2)得到的固形物Ⅱ悬浊液浸泡喜树种子，浸泡温度35℃，浸泡时间12小时；

(4) 在培养皿内铺四层用水润湿的滤纸，将按步骤(3)处理后的喜树种子放在滤纸上，盖上培养皿盖，培养皿置入培养箱中进行发芽，至培养皿放入培养箱后的第10天，终止发芽。

用蒸馏水代替固形物Ⅱ悬浊液，只进行本实施例操作步骤中的步骤(3)和步骤(4)，以此作为对照处理，进行喜树种子发芽。统计分析结果表明本实施例喜树发芽高峰日为浸种后第7天，发芽势为59.2%，发芽率为81.3%；对照喜树发芽高峰日为浸种后第9天，发芽势为22.6%，发芽率为54.2%，说明本实施例提供的方法，喜树种子的发芽势和发芽率均明显提高，同时发芽高峰日也提前了2天。

实施例3

本实施例中喜树种子采自广西。喜树种子发芽的操作步骤如下：

(1) 取南方红豆杉枝叶干燥、粉碎得到320克粉末Ⅰ，甲醇与粉末Ⅰ按质量比10：1混合、回流提取1小时，过滤提取液，滤液浓缩至干，得到61克固形物Ⅱ；

(2) 将步骤(1)得到的61克固形物Ⅱ与水按质量比1：1000混合，超声处理10分钟，得到固形物Ⅱ悬浊液；

(3) 用步骤(2)得到的固形物Ⅱ悬浊液浸泡喜树种子，浸泡温度30℃，浸泡时间36小时；

(4) 在培养皿内铺四层用水润湿的滤纸，将按步骤(3)处理后的喜树种子放在滤纸上，盖上培养皿盖，培养皿置入培养箱中进行发芽，至培养皿放入培养箱后的第12天，终止发芽。

用蒸馏水代替固形物Ⅱ悬浊液，只进行本实施例操作步骤中的步骤(3)和步骤(4)，以此作为对照处理，进行喜树种子发芽。统计分析结果表明本实施例喜树发芽高峰日为浸种后第6天，发芽势为52.2%，发芽率为89.6%；对照喜树发芽高峰日为浸种后第9天，发芽势为25.4%，发芽率为68.9%，说明本实施例提供的方法，喜树种子的发芽势和发芽率均明显提高，同时发芽高峰日也提前了3天。