1.本发明涉及
羊水干细胞分泌组在干眼症以及
角膜伤口愈合中的应用。
背景技术：
2.羊水细胞被用来作为常规产前诊断以检测胎儿染体是否异常。此外，在怀孕12周前的羊水中发现了一些具有造血前驱细胞特征的小的有核细胞，表示这些细胞可能来自卵黄囊。自2004年至2006年间有些报导关于在羊水中成功分离并鉴定存在另一组干细胞。这些羊水干细胞被证明表现间质干细胞以及神经干细胞的特异性生物标记物，具有分化成骨骼、软骨、脂肪，以及神经细胞的能力。经证实，羊水干细胞在体外可大量稳定增殖，且增殖速度快于从成人骨髓及脂肪中得到的间质干细胞，且无胚胎干细胞的致瘤潜力。因此，羊水干细胞具有应用于临床医学的潜力。
3.干眼症通常被称为干燥性角膜结膜炎。每年有数百万人患有这种疾病，特别是由于电子产品的快速发展，这是当今引起干眼症的最常见原因。干眼症状传统上是通过眼睑卫生、局部抗生素、四环素、脱氧羟四环素、抗发炎化合物(环孢素)，或皮质类固醇来控制的，这些通常耗时、令人沮丧，且经常是无效的或效果各有不同。
4.因此，需要开发一种能够有效缓解症状的新颖干眼症剂。
技术实现要素：
5.本文提供的一方面为一个体干眼症的方法，包含对该个体施用一包含羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体的的
组合物；其中该分泌组通过以下步骤的方法所制备：于一基础培养基中培养羊水干细胞24-72小时以得到一培养基；离心后收集该培养基的上清液，以及过滤该上清液以得到该分泌组。
6.于一具体实施例中，该上清液通过孔径小于0.5μm的过滤器过滤；较佳地，该孔径小于0.22μm。
7.于一具体实施例中，该组合物为一医药组合物，其局部施用于该个体的眼中，较佳以眼凝胶、滴眼液、洗眼液、点眼液、眼部插入物、眼膏或眼喷雾剂的形式施用。
8.本文提供的另一方面为用于一个体的角膜上皮伤口愈合的方法，包含对该个体施用包含一有效量的如本文所公开的羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体的组合物。
9.于另一方面，本文提供一种用于干眼症的医药组合物，包含羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体；其中该分泌组通过以下步骤的方法所制备：于一基础培养基中培养羊水干细胞24-72小时以得到一培养基；离心后收集该培养基的上清液，以及过滤该上清液以得到该分泌组。
10.于另一方面，本文提供一种用于角膜上皮伤口愈合的医药组合物，包含对一有此需要的个体施用一医药组合物，该医药组合物包含一有效量的如本文所公开的羊水干细胞分泌组以及一医医药上可接受的载体。
11.于又一方面，本文提供该羊水干细胞分泌组在制备一用于干眼症的药物的用途。
12.于又一方面，本文提供该羊水干细胞分泌组在制备用于角膜上皮伤口愈合的药物的用途。
13.本发明还提供该羊水干细胞分泌组在制备一干眼症药物的用途。
14.本发明还提供该羊水干细胞分泌组在制备一角膜上皮伤口愈合药物的用途。
15.本发明将通过以下实施例进一步说明。然而，应当理解的是，以下实施例仅用于说明的目的且不应被解释为在实施中限制本发明。
附图说明
16.当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的前述概述以及以下详细描述。为了说明本发明，在附图中显示目前较佳的具体实施例。
17.于附图中：
18.图1所示为实施例1实验的示意时间轴。
19.图2所示为根据图1在第0天、第4天，以及第7天从实施例1中的每只小鼠收集的泪液量的分布(*p《0.05，相较于损伤组)。
20.图3所示为根据图1在第0天、第4天，以及第7天从实施例1中的每只小鼠的眼睛上测量的泪膜破裂时间(tear break up time，tbut)的曲线(*p《0.05，相较于损伤组)。
21.图4所示为实施例1小鼠眼睛受到uvb损伤的角膜表面照片，包括(a)角膜混浊度的评估，(b)角膜平滑度，(c)角膜地图，以及(d)角膜染(lissamine green stain)检查；其中较高的评估分数代表较高的损害严重程度(*p《0.05，相较于损伤组)。
22.图5所示为mtt测定结果，其说明实施例2中不同浓度afsc分泌组处理与人类角膜上皮细胞在24、48、72小时活细胞数的相关性(*p《0.05，相较于浓度0)。
23.图6所示为伤口愈合实验结果，其说明afsc分泌组处理后6、12、24，以及48小时后，人类角膜上皮细胞迁移效率(*p《0.05，**p《0.001，相较于浓度0)。
具体实施方式
24.为使本发明的上述及其他技术内容、特征及效果得以清楚地展示，以下具体实施例结合附图阅读。通过具体实施例的描述，本领域普通技术人员将清楚地了解本发明为实现上述方面所采用的技术方法及效果。
25.除非另有定义，否则本文中使用的所有技术及科学术语具有与本发明内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同的定义。
26.在说明书及所附申请专利范围中使用的单数形式「一」、「一个」以及「该」包括复数所指对象，除非上下文另有明确规定。于本技术中，除非另有说明，否则使用「或」或者「以及」表示「及/或」。此外，术语「包括(including)」以及例如「包括(include)」、「包括(includes)」以及「包括(included)」等其他形式的使用并非限制性的。此处使用的章节标题仅用于组织目的，不应被解释为限制所描述的主题。除非另有说明，本文所用材料均为市售材料，容易获得。
27.如本文所用，本文使用的「约」一词或类似用语指测量的量，例如剂量，包括于一实
施例中相对于一特定量的偏差
±
15％或
±
10％；于一较佳实施例中相对于一特定量的偏差
±
5％；在另一较佳实施例中相对于一特定量的偏差
±
1％；或于一最佳实施例中相对于一特定量的偏差
±
0.1％；而数量所属的物质的性质不受影响。
28.如本文所用，本文所用的「疾病」一词指需要医学干预或需要医学干预的情况的任何症状、感染、病症或症候。这种医学干预可包括、诊断，及/或预防。
29.「干眼症(dry eye disease，ded)」、「干眼症候(dry eye syndrome，des)」、「干燥性角膜结膜炎(keratoconjunctivitis sicca，kcs)」等词或简称「干眼症」可互换使用，指由泪液分泌减少或泪膜蒸发增加所引起的眼病。干眼症可能是另一种导致干眼症的潜在疾病的结果，例如，干燥症候(sjogren's syndrome)、更年期或类风湿性关节炎。干眼症亦可能是发炎反应的并发症之一。干眼症亦可能是感染的结果，或药物的副作用，或接触可能会导致干眼症的症状或病症的毒素、化学品或其他物质。干眼症可表现为本领域已知的一种或多种眼科临床症状，包括但不限于干燥、异物感、灼热、瘙痒、刺激、发红、眼痛、视力模糊及/或视力下降。
30.如本文所用，「分泌组」一词，亦称为「条件培养基」，指在培养细胞时从细胞分泌到细胞环境(进入培养基中)的蛋白质的全部(或集合)。
31.如本文所用，「干细胞」一词为分化为构成组织的各个细胞之前的未分化细胞的总称，且干细胞具有通过特定分化刺激分化为特定细胞的能力。根据本发明，用于制备本发明分泌组的细胞为羊水干细胞。
32.如本文所用，「组合物」一词是指由多于一种活性成分的混合或组合产生的产品，并且包括该活性成分的固定及非固定组合。「固定组合」一词指活性成分与某种助剂都以单一实体或剂量的形式同时给予患者。「非固定组合」一词是指将该活性成分以及某种助剂作为单独的实体同时、并行或依序给予患者，没有特定的干预时间限制，其中这种施用方式在患者体内提供了两种药剂的有效含量。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如，三种或更多种活性成分的施用。
33.根据本发明，本文所用的「医药组合物」一词是指一有效量的羊水干细胞分泌组或条件培养基以及可选择的一医药上可接受的载体。
34.本文所用的「医药上可接受的」一词是指在合理的医学判断范围内，药物适合与服用该药物的个体(如人类)的组织接触使用，没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，并具有合理的益处/风险比。每个载体必须与其他成分兼容才是「可接受的」。
35.本文所用的「载体」一词是指具有辅助细胞或组织吸收活性成分功能的无毒化合物或药剂。载体选自例如，赋形剂、佐剂、稀释剂、填充剂，或增积剂、造粒剂、包覆剂、释放控制剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、界面活性剂、抗氧化剂、缓冲剂、悬浮剂、增稠剂、稳定剂或其他用于医药组合物的载体。载体的实例包括，但不限于，聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羟乙基纤维素环糊精、羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose，cmc)、磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline，pbs)、水、乳化剂(例如油及水乳化剂)，或润湿剂。可根据需要或便利性添加张力调节剂。它们包括，但不限于，盐类，特别是氯化钠、氯化钾、甘露醇以及甘油，或任何其他合适的眼科可接受的张力调节剂。可使用各种缓冲剂以及调节ph的方法，只要所得制剂为眼科可接受的。因此，缓冲液包括醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液，以及硼酸盐缓冲液。根据需要，酸或碱可用于调节这些
制剂的ph值。类似地，用于本发明的眼科可接受的抗氧化剂包括，但不限于，焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱胺酸、丁基化羟基苯甲醚以及丁基化羟基甲苯。可包含在眼用制剂中的其他赋形剂成分为螯合剂及抗生素。较佳的螯合剂为乙二胺四乙酸二钠，尽管亦可使用其他螯合剂代替之或与其结合使用。可用于本发明的抗生素的非限制性实例包括硫酸曲美普林(trimethoprim)/硫酸多黏菌素b、加替沙星(gatifloxacin)、盐酸莫西沙星(moxifloxacin)、妥布霉素(tobramycin)、太古盘宁素(teicoplanin)、万古霉素(vancomycin)、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、阿莫西林(amoxicillin)、青霉素(penicillin)、胺芐青霉素(ampicillin)、羧芐青霉素(carbenicillin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、阿米卡星(amikacin)、健大霉素(gentamicin)、康霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)，以及链霉素(streptomycin)。
36.如本文所用，「有效量」或「有效量」等词是指施用的药剂或化合物的量足够到在一定程度上缓解所的疾病或病症的一种或多种症状。结果可为减少及/或减轻疾病的征状、症状或原因，或生物系统的任何其他所需改变。例如，用于用途的一「有效量」为提供临床上显著减少疾病的症状所需的包含本文公开的胜肽或蛋白质的组合物的量。在任何个别情况下，适当的「有效」量可使用技术来确定，例如剂量递增研究。
37.如本文所用，「(treat)」、「(treating)」或「(treatment)」等词包括减轻、缓和或改善一疾病或病症的至少一种症状、预防额外的症状、抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展、缓解该疾病或病症、导致该疾病或病症消退、缓解由该疾病或病症引起的一病症、或预防性及/或性地停止该疾病或病症的症状。
38.本发明提供一种包含羊水干细胞分泌组的组合物；其中该分泌组通过以下步骤的方法所制备：于一基础培养基中培养羊水干细胞24-72小时；收集并离心该基础培养基的上清液，以及过滤该上清液以得到该分泌组。
39.于一具体实施例中，该上清液通过孔径小于0.5μm的过滤器过滤。较佳地，该过滤器的孔径为0.45μm、0.3μm，或0.22μm。
40.于一具体实施例中，该组合物为一医药组合物，其进一步包含一医药上可接受的载体。
41.根据本发明，一种干眼症的方法包含对一有此需要的个体施用一包含羊水干细胞分泌组的医药组合物。
42.根据本发明，一种角膜上皮伤口愈合的方法包含对一有此需要的个体施用一包含羊水干细胞分泌组的医药组合物。
43.于一实施例中，将该医药组合物局部施用于该个体的眼睛。
44.于一具体实施例中，该医药组合物为一眼科制剂的形式，例如眼凝胶、滴眼液、洗眼液、点眼液、眼部插入物、眼膏或眼喷雾剂。
45.本发明还提供羊水干细胞分泌组在制备干眼症药物的用途。
46.本发明还提供羊水干细胞分泌组在制备角膜上皮伤口愈合药物的用途。
47.通过以下实施例进一步说明本发明，提供这些实施例是为了演示而非限制。
48.实施例
49.实施例1
50.性羊水干细胞(amniotic fluid stem cells，afsc)通过包含以下步骤的方法获得：从合格细胞库，例如工作细胞库(working cell bank，wcb)解冻细胞并在mscxf培养基(无血清/无异种)中培养该细胞。将afscs在基础培养基(α-最低必需培养基)中进一步培养48小时以收集afsc的条件培养基。
51.随后，将自细胞培养中收集的条件培养基以2,000rpm的速度离心约10分钟，以0.22μm滤膜过滤除去细胞残留物，得到afsc的分泌组，保存于-20℃冰箱中备用。
52.实施例2
53.本实施例采用uvb照射诱导干眼症动物模型，根据实验结果评估羊水干细胞分泌组干眼症的效果。
54.材料与方法
55.于本实施例中使用雌性icr白化小鼠(biolasco公司)作为动物模型。本实验在小鼠5至6周龄时开始。icr小鼠分为6组，每组包括6只小鼠(n＝6)：
56.1.健康对照组(空白组)：以0.9％生理盐水滴眼处理；
57.2.阳性对照组(损伤组)：以0.9％生理盐水滴眼液以及uvb处理造成损伤；
58.3.1/5羊水干细胞分泌组(1/5d组)：以uvb处理造成损伤，并以稀释1/5的羊水干细胞(afsc)分泌组处理；
59.4.1/5羊水干细胞分泌组(1/5d组)：以uvb处理造成损伤，并以稀释1/5的afsc分泌组以滴眼方式处理；
60.5.1/10羊水干细胞分泌组(1/10d组)：以uvb处理造成损伤，并以稀释1/10的afsc分泌组以滴眼方式处理；
61.6.1/20羊水干细胞分泌组(1/20d组)：以uvb处理造成损伤，并以稀释1/20的afsc分泌组以滴眼方式处理；
62.7.人工泪液对照组(artificial tear，aft组)：以0.9％人工泪液(allergan公司)以滴眼方式处理，并以uvb处理造成伤害。
63.自干眼诱导开始前3天起，根据所提出的方案在每天10:00以及17:00对所有小鼠施用滴眼剂。uvb照射自第1天至第7天连续进行，其中uvb的强度为0.72j/cm2。
64.实验的示意时间轴如图1所示。于第0天、第4天，以及第7天收集泪液，测量泪液量的变化；于第0天、第4天，以及第7天还测量了每只小鼠的泪膜破裂时间(tear break up time，tbut)。
65.于第8天牺牲小鼠并进一步进行组织病理学分析。
66.结果
67.测量自每只小鼠收集的泪液量，结果如图2所示。如图2所示，以afsc分泌组的组别泪液分泌效能提高，尤其是在第7天以1/10d的组别。相较于阳性对照组(损伤组)，在第4天及第7天以afsc分泌组(1/5d、1/10d，以及1/20d)处理的组别的改善显示出统计学显著性(p《0.05)。相较之下，虽然人工泪液(aft)的小鼠在第7天表现出显著改善，但相较于afsc分泌组，人工泪液在改善泪液分泌方面的功效仍然较低。
68.测量每只小鼠的泪膜破裂时间(tbut)，结果如图3所示。如图3所示，除健康对照组外，各组的tbut逐渐下降，直至第7天。然而，在第4天及第7天，以afsc分泌组(1/5d、1/10d，以及1/20d)处理的组别的tbut得到改善，相较于阳性对照组显示出统计学显著性(p《
0.05)。虽然结果没有明显的剂量依赖性效应，但相较于aft组，以afsc分泌组处理的组别的泪膜稳定性维持效果更高。
69.角膜表面摄影包括评估角膜混浊度的评估、角膜平滑度、角膜地图，以及角膜染(lissamine green stain)检查，其中较高的评估分数代表较高的损害严重程度。摄影结果如图4所示。
70.如图4所示，以afsc分泌组处理的组别的角膜损伤均有所减轻。特定而言，以afsc分泌组处理的组别的角膜混浊度降低，这也显示出统计学显著性(p《0.05)。此外，角膜平滑度、角膜地图，以及角膜染(lissamine green stain)检查也显示出以afsc分泌组后的改善效果。
71.此外，尽管aft在本文中作为比较并且也显示出改善效果，但如图4所示，以aft的改善效果较差，因此结果显示afsc分泌组为aft的潜在替代品。
72.将包括角膜、泪腺以及睑板腺(亦称为睑腺)等眼组织进行组织染和ihc染。
73.h&e染显示细胞的形态并指示组织的完整性。ihc的对象包括cox-2、p63、pcna、nfκ-b、p53，以及4-hne。cox-2以及nfκ-b为免疫反应及发炎反应的调节剂。p63以及pcna为细胞增殖及繁殖的调节剂。p53为一种凋亡因子。4-hne与氧化压力有关。
74.表1所示为角膜组织中cox-2、p63，以及pcna的h&e染以及ihc染的定量结果。(标记「+」表示健康程度。)如表1所示，以afsc分泌组处理可有效缓解角膜组织在uvb损伤后的发炎反应，增强细胞增殖，其中p63以及pcna的表现升高但cox-2的表现降低。以下评估各组的分数：空白组》1/10d组》1/5d组》1/20d组》aft组》损伤组。
75.表1
[0076][0077]
表2展示了泪腺组织中cox-2、p53以及nfκ-b的h&e染以及ihc染的定量结果。如表2所示，以afsc分泌组处理可有效缓解泪腺组织中在uvb损伤后的发炎反应以及抑制细胞凋亡，其中cox-2、p53，以及nfκ-b的表现降低。以下评估各组的分数：空白组》1/10d组》1/5d组＝1/20d组》aft组》损伤组。
[0078]
表2
[0079][0080][0081]
表3展示了睑板腺组织中cox-2、4-hne，以及nfκ-b的h&e染以及ihc染的定量
结果。如表3所示，以afsc分泌组处理可有效缓解睑板腺组织中在uvb损伤后的发炎反应并减少氧化压力，其中cox-2、4-hne，以及nfκ-b的表现减少。以下评估各组的分数：空白组》1/10d组》1/5d组》1/20d组》aft组》损伤组。
[0082]
表3
[0083][0084]
由表1至表3可见，以afsc分泌组处理能够维持细胞组织的完整性、缓解发炎反应、挽救细胞凋亡、增强uvb损伤后的增殖，显示afsc的分泌组应该是恢复及修复眼组织，如角膜的有效试剂。
[0085]
实施例3
[0086]
于本实施例中，以afsc的分泌组处理人类角膜上皮细胞并观察其作用。
[0087]
材料与方法
[0088]
afsc条件培养基的获得方法与实施例1相同，此处不再赘述。
[0089]
将人类角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells，hcec)(thermo fisher公司)于角质细胞无血清培养基(serum free medium，sfm)(thermo fisher公司)中于37℃及5％co2条件下培养。
[0090]
为了获得细胞悬浮液，去除培养基并以3ml dpbs(dulbecco的磷酸盐缓冲盐水)洗涤细胞。去除dpbs后加入1ml 0.05％胰蛋白酶，于37℃下放置5-7分钟。
[0091]
在显微镜下确认细胞呈圆形分离后，将细胞悬浮于2ml培养基中以减弱胰蛋白酶的反应。
[0092]
取出20μl悬浮液，加入等体积的台盼蓝与该悬浮液混合。之后，取出10μl混合物并在细胞计数器上计数细胞数。
[0093]
进行mtt测定以评估afsc分泌组对角膜细胞的影响。mtt测定是用于评估细胞代谢活性以及存活力的比测定。在特定条件下，nad(p)h-依赖性细胞氧化还原酶可以反映存在的活细胞数量。这些酶能够将四唑鎓染剂mtt 3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑还原为不溶性的甲臜，其呈紫。
[0094]
hcec置于96孔盘中，每孔8,000个细胞。加入100μl培养基，将细胞培养24小时。之后，将细胞以不同浓度的100μl afsc分泌组溶液(1/2、1/8，以及1/32稀释)处理，并分别继续培养24、48，以及72小时。
[0095]
按上述规定时间结束培养后，更换培养基为200μl mtt溶液，放置3小时进行反应。mtt溶液进一步以dmso代替以溶解晶体。在elisa读取仪下分析细胞以检测波长570nm下的吸光度。
[0096]
另一方面，进行伤口愈合试验。1.6x 105个细胞在12孔盘中培养24小时，每孔含有1ml培养基。培养结束后，以200μl移液器吸头在孔底划3条线。然后去除培养基，以dpbs洗涤细胞，然后加入500μl培养基。在100x显微镜下观察并拍照记录细胞迁移的起始状态(0小
时)。
[0097]
随后，加入不同浓度(1/2、1/8，以及1/32稀释)的500μl afsc分泌组溶液。在细胞迁移开始后6、12、24，以及48小时进一步观察并拍照。根据以下公式计算迁移距离：
[0098]
距离＝[(d0-dn)/d0]x 100％
[0099]
其中d0为0小时刮痕宽度，dn为6、12、24、48小时后刮痕宽度。
[0100]
所有实验结果均表示为平均值
±
sd(标准偏差)。同构型检验的统计采用单因子独立变异数分析(one way anova)，每个时间点的显著性采用scheffe氏事后检定方法进行。p《0.05表示有统计学显著性；p《0.001表示高统计显著性。
[0101]
结果
[0102]
mtt试验结果显示afsc分泌组对人类角膜细胞的影响如图5所示，说明以不同浓度afsc分泌组处理以及在24、48、72小时细胞活力的相关性。
[0103]
如图5所示，od570的吸光度(细胞活力)随着afsc分泌组含量的增加而增加。提高存活力的效率也随着afsc分泌组的含量而增加。在所有组别中，以1/2稀释的afsc分泌组处理的组别显示出最显著的改善。
[0104]
伤口愈合试验的结果显示afsc分泌组对角膜细胞迁移的影响，如图6所示，说明以afsc分泌组处理6、12、24，以及48小时的迁移效率。
[0105]
如图6所示，未以afsc分泌组处理的组别(阴性对照组)在0至48小时内有轻微且不显著的迁移。反之，afsc分泌组在24至48小时内迁移明显。此外，以1/2以及1/8稀释的afsc分泌组处理的组别在48小时显示出大约100％的迁移，表明刮痕的宽度几乎完全恢复，以1/32稀释的afsc分泌组处理的组别显示大约80％的迁移。
[0106]
由本实施例的结果观之，afsc的分泌组能够提高人类角膜细胞的存活率以及活力，并提高人类角膜细胞的迁移效率。因此，afsc的分泌组显示出作为干眼症药物的潜在功效。
[0107]
虽然这里已经显示并描述本发明的较佳实施例，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施例仅提供为示例并可以组合实施。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变，以及替换。应当理解的是，在实践本发明时可采用对本文所描述的本发明的实施例的各种替代。以下申请专利范围的目的在限定本发明的范围，并且由此涵盖在这些权利要求及其等同物的范围内的方法及结构。
技术特征：
1.一种一个体干眼症的方法，包含对该个体施用一包含羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体的组合物；其中该分泌组通过以下步骤的方法所制备：于一基础培养基中培养羊水干细胞24-72小时以得到一培养基；离心后收集该培养基的上清液，以及过滤该上清液以得到该分泌组。2.如权利要求1所述的方法，其中该上清液通过孔径小于0.5μm的过滤器过滤。3.如权利要求2所述的方法，其中该上清液通过孔径小于0.22μm的过滤器过滤。4.如权利要求1所述的方法，其中将该组合物局部施用于该个体的眼睛。5.如权利要求4所述的方法，其中该医药组合物为眼凝胶、滴眼液、洗眼液、点眼液、眼部插入物、眼膏或眼喷雾剂的形式。6.一种用于一个体角膜上皮伤口愈合的方法，包含对该个体施用一组合物，该组合物包含一有效量的如权利要求1、2或3所定义的羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体。7.如权利要求6所述的方法，其中将该医药组合物局部施用于该个体的眼睛。8.如权利要求7所述的方法，其中该医药组合物为眼凝胶、滴眼液、洗眼液、点眼液、眼部插入物、眼膏或眼喷雾剂的形式。9.一种干眼症的医药组合物，包含羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体；其中该分泌组通过以下步骤的方法所制备：于一基础培养基中培养羊水干细胞24-72小时以得到一培养基；离心后收集该培养基的上清液，以及过滤该上清液以得到该分泌组。10.如权利要求9所述的医药组合物，其中该上清液通过孔径小于0.5μm的过滤器过滤。11.如权利要求10所述的医药组合物，其中该上清液通过孔径小于0.22μm的过滤器过滤。12.如权利要求9所述的医药组合物，其中将该组合物局部施用于个体的眼睛。13.如权利要求12所述的医药组合物，其为眼凝胶、滴眼液、洗眼液、点眼液、眼部插入物、眼膏或眼喷雾剂的形式。14.一种用于角膜上皮伤口愈合的医药组合物，包含权利要求10、11、12或13所述的羊水干细胞分泌组以及一医药上可接受的载体。15.一种羊水干细胞分泌组在制备一用于干眼症的药物的用途，其中该羊水干细胞分泌组如权利要求1、2或3所定义。16.一种羊水干细胞分泌组在制备用于角膜上皮伤口愈合的药物的用途，其中该羊水干细胞分泌组如权利要求1、2或3所定义。
技术总结
本文公开一种羊水干细胞分泌组用于干眼症的应用，具体地，涉及一种干眼症或角膜伤口愈合的方法或医药组合物，包含对一有此需要的个体施用一有效量的羊水干细胞分泌组。还提供羊水干细胞分泌组在制备干眼症或角膜伤口愈合药物中的用途。眼症或角膜伤口愈合药物中的用途。眼症或角膜伤口愈合药物中的用途。
技术研发人员：
黄效民 谢镇安 林培正
受保护的技术使用者：
永立荣生医股份有限公司
技术研发日：
2022.01.07
技术公布日：
2022/12/19
