用于冠状病毒感染和/或预防的组合物的制作方法

用于冠状病毒感染和/或预防的组合物
1.本发明涉及包含选自表1和/或表2中所示化合物的化合物的组合物，其应用于和/或预防受试者的冠状病毒感染。本发明还涉及与所述组合物相关的方法和用途。
2.冠状病毒科通常会引起轻微的呼吸道疾病，但sars-cov-1、mers和sars-cov-2等β-冠状病毒感染可导致急性呼吸道疾病和高死亡率，尤其是在有潜在健康病况的个体中。在过去的20年中，冠状病毒科出现了两次严重的疫情，2002/2003年的sars和2012年的mers。最近描述的sars-cov-2感染导致一种名为covid-19的疾病。为了寻针对covid-19的有效药物，已经启动了多项介入临床试验(kupferschmidt&cohen(2020)，science 367：1412，doi：10.1126/science.367.6485.1412)。为covid-19试验选择单一药物或联合，是基于先前描述的针对sars-cov-1、埃博拉病毒、艾滋病毒和疟疾的活性。生物信息学分析还提出了基于预测的病毒蛋白和宿主细胞途径之间的相互作用组的其他潜在药物(gordon et al.(2020)，doi.org/10.1101/2020.03.22.002386v1)。总体而言，在没有安全有效的疫苗的情况下，对现有药物进行再利用是卫生机构满足患者需求的一种务实策略，预计至少在covid-19大流行的前12个月会出现这种情况。尽管如此，在监管部门批准covid-19的任何药物之前，仍需要进行适当控制的临床疗效和安全性研究，即使是使用重新利用的药物。
3.然而，本领域需要改进的手段和方法来和/或预防冠状病毒感染的感染，从而避免现有技术的缺点。该问题通过本文公开的具有独立权利要求的特征的手段和方法来解决。在从属权利要求中列出了可以以独立方式或以任意组合方式实现的有益实施方案。
4.因此，本发明涉及包含选自表1中所示化合物的化合物的组合物，其应用于和/或预防受试者的冠状病毒感染。
5.一般而言，本文中使用的术语将被赋予本领域普通技术人员其普通和惯用的含义，并且除非另有说明，否则不限于特殊或定制的含义。如在下文中使用的，术语“具有”、“包含”或“包括”或其任何任意语法变体以非排他的方式使用。因此，除了这些术语引入的特征之外，这些术语既可以指在本文中描述的实体中不存在其他特征的情况，也可以指存在一个或多个其他特征的情况。例如，表述“a中有b”、“a包含b”和“a包括b”都可以指除b之外，a中不存在其他元素的情况(即a完全由b组成的情况)；以及除b外，实体a中还存在一个或多个其他元素，如元素c、元素c和d或甚至其他元素的情况。此外，如本领域技术人员所理解的，表述“包含一(comprising a/an)”优选是指“包含一个或多个”，即等同于“包含至少一个”。
6.此外，如在下文中使用的，术语“优选地”、“更优选地”、“最优选地”、“特别地”、“更特别地”、“具体地”、“更具体地”或类似的术语，与可选的特征共同使用，而不限制进一步的可能性。因此，由这些术语引入的特征是可选特征，并且不旨在以任何方式限制权利要求的范围。如本领域技术人员将认识到的，本发明可以通过使用替代特征来执行。类似地，由“在一个实施方案中”或类似表述引入的特征旨在为可选特征，对本发明的进一步实施方案没有任何限制，对本发明的范围没有任何限制，并且对以这种方式引入的特征与本发明的其他可选或非可选特征组合的可能性没有任何限制。
7.如本文所用，如果没有另外说明，术语“标准条件”涉及iupac标准环境温度和压力(satp)条件，即优选地，25℃的温度和100kpa的绝对压力；还优选地，标准条件包括ph7。此外，除非另有说明，术语“约”是指具有相关领域公认的技术精度的指示值，优选地是指指示值
±
20％，更多优选
±
10％，最优选
±
5％。此外，术语“基本上”表示不存在对指示结果或使用有影响的偏差，即潜在偏差不会导致指示结果偏差超过
±
20％，更优选
±
10％，最优选
±
5％。因此，“基本上由......组成”是指包括指定的成分，但不包括其他成分，除了作为杂质存在的物质、由于用于提供这些成分的过程而存在的不可避免的物质，以及为了实现本技术技术效果以外的目的而添加的成分。例如，使用短语“基本上由...组成”定义的组合物，包括任何已知的可接受的添加剂、赋形剂、稀释剂、载体等。优选地，基本上由一组组分组成的组合物，将包含小于5重量％，更优选小于3重量％，甚至更优选小于1重量％，最优选小于0.1重量％的非指定的成分。
8.如本文所用，术语“组合物”涉及包含如指定的化合物和任选的一种或多种可接受的载体的物质组合物。优选地，所述组合物为药物组合物；因此，该组合物优选地包含指定的作为药学活性化合物的化合物，并且优选地，载体是药学上可接受的载体。药学活性化合物可以配制成，优选药学上可接受的盐。优选的盐，包括乙酸盐、甲酯、硫酸盐、氯化物等。对于特定化合物，进一步优选的盐在本文别处指明。该组合物包含至少一种所示的化合物；因此，该组合物优选包含一种指定的化合物或包含多种化合物，术语“多种”优选指至少两种。
9.优选地，组合物是药物组合物，即，优选地，药物(medicament)。术语“药物”和“药物组合物”原则上是技术人员已知的。如本文所提及的，该术语涉及包含作为药学活性化合物的化合物和一种或多种其他组分(如一种或多种药学上可接受的载体)的任何组合物。药学活性化合物可以以液体或干燥形式存在，例如冻干形式。例如，药物活性化合物可以与甘油和/或稳定剂(例如，还原剂、人血清白蛋白)一起存在。药物通常是全身或局部施用，优选口服、通过吸入、或肠胃外施用，例如通过静脉内施用；然而，优选地，也可以设想皮下或肌肉内施用。然而，取决于制剂的性质和所需的应用，药物也可以通过其他途径施用。药物活性化合物是药物中的活性成分或药(drug)，并且优选以通过将药物与标准药物载体按照常规程序组合制备的常规剂型施用。这些程序可能涉及混合、制粒和压缩，或根据所需的制剂把成分溶解。可以理解的是，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特性取决于与其组合的活性成分的量、施用途径和其他众所周知的变量。载体必须在与制剂的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上是可接受的。使用的药物载体可以包括固体、凝胶或液体。固体载体的示例是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的示例是磷酸盐缓冲液、糖浆、油、水、乳液、各种类型的润湿剂等。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域公知的延时材料，如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或与蜡一起。所述合适的载体包括上述那些和本领域熟知的其它载体，参见例如，remington
′
s pharmaceutical sciences，mack publishing company，easton，pennsylvania。选择稀释剂以不影响组合的生物活性。这种稀释剂的实例是蒸馏水、生理盐水、林格氏液、葡萄糖溶液和汉克(hank
′
s)溶液。此外，药物组合物或制剂还可包含其他载体、佐剂或无毒、非性、非免疫原性稳定剂等。本文所指的药物优选至少施用一次，例如作为丸剂。然而，所述药物可以施用一次以上，优选地，至少两次，例如在定义的时间窗口后永久或定期施用。
10.如本文所用，术语“化合物”涉及选自表1或表2的化合物，优选选自表2中所示的化合物；优选地，所述化合物是由表2中所示的cas编号鉴别的化合物。根据具体情况，所述化合物可以以游离酸、游离碱或其盐的形式使用。本领域技术人员优选选择适合于预期用途和/或模式或施用的化合物的药学相容的酸、碱或盐。如本文实施例中所示，本文提及的化合物是被批准作为药物销售，或者为此目的而被积极开发。因此，化合物及其结构原则上是技术人员已知的，并且优选地，本文提及的化合物以用于该化合物的至少一种已知应用的形式、制剂、方式和/或剂量施用。综上所述，该化合物优选为nsc319726。优选地，该化合物是安姆伐替尼(mp-470)。优选地，该化合物是酪氨酸磷酸化抑制剂ag 879(ag 879)。优选地，该化合物是gsk2606414。优选地，该化合物是聚多卡醇。优选地，该化合物是ai-10-49。优选地，该化合物是vlx600。优选地，该化合物是依沙维林，更优选盐酸依沙维林。优选地，该化合物是阿沃西地(alvocidib)。优选地，该化合物是。优选地，该化合物是十六烷基吡啶，更优选氯化十六烷基吡啶。优选地，该化合物是硫鸟苷。优选地，该化合物是达匹韦林(tmc120)。优选地，该化合物是ly2228820(雷美替尼)。优选地，该化合物是，更优选盐酸。优选地，该化合物是塔纳普罗吉(tanaproget)。优选地，该化合物是奥替尼啶，更优选奥替尼啶。优选地，该化合物是阿米三嗪，更优选甲磺酸阿米三嗪。优选地，该化合物是索拉非尼，更优选甲苯磺酸索拉非尼。优选地，该化合物是zk-93423。优选地，该化合物是硫柳汞。优选地，该化合物是瑞戈非尼(bay 73-4506)。优选地，该化合物是氯苄达咗。优选地，该化合物是雷夫康唑。优选地，该化合物是亚甲蓝。优选地，该化合物是米巴帕他(mibampator)。优选地，该化合物是高三尖杉酯碱。优选地，该化合物是血卟啉。优选地，该化合物是lgk-974。优选地，该化合物是泊沙康唑。优选地，该化合物是酮康唑。优选地，该化合物是奈非那韦，更优选甲磺酸奈非那韦。优选地，该化合物是jte-013。优选地，该化合物是本玛莫德(bentamapimod)。优选地，该化合物是ro5126766(ch5126766)。优选地，该化合物是洛那法尼(lonafarnib)(sch66336)。优选地，该化合物是阿哌沙班。优选地，该化合物是培西达替尼。优选地，该化合物是屈他维林。优选地，该化合物为lde225(nvp-lde225)。优选地，该化合物为雷特格韦(erismodegib)。优选地，该化合物为pfk-015。优选地，该化合物为阿伐曲泊帕。优选地，该化合物为3
′‑
氟苄基螺环酮(3
′‑
fluorobenzylspiperone)。优选地，该化合物为依替福辛，更优选盐酸依替福辛。优选地，该化合物为阿伐麦布(ci-1011)。优选地，该化合物为洛匹那韦(abt-378)。优选地，该化合物为dcpib。优选地，该化合物为ph-797804。优选地，该化合物为氟桂利嗪。优选地，该化合物为依碳酸氯替泼诺。优选地，该化合物为利多氟嗪。优选地，该化合物为bp-897。优选地，该化合物为氯康唑，更优选为盐酸氯康唑。优选地，该化合物为pf-670462。优选地，该化合物为奥昔康唑，更优选硝酸奥昔康唑。优选地，该化合物为amg-9810。优选地，该化合物为依匹哌唑。优选地，该化合物为他匹莫德(talmapimod)。优选地，该化合物为阿哆嗪。优选地，该化合物是cc-223。优选地，该化合物是三尖杉酯碱。优选地，该化合物是盐酸巴尼地平。优选地，该化合物是瓦他拉尼。优选地，该化合物是osi-906(林西替尼)。优选地，该化合物是伊达比星，更优选盐酸伊达比星。优选地，该化合物是吖啶黄，更优选盐酸吖啶黄。优选地，该化合物是巴司格鲁(basimglurant)。优选地，该化合物是nnc-05-2090。优选地，该化合物是原黄素，更优选硫酸原黄素。优选地，该化合物是依塞曲匹(evacetrapib)(ly2484595)。优选地，该化合物是ly335979(唑喹达三盐酸盐)。优选地，该化合物是普尼拉明。优选地，该化
合物是福沙匹坦(fosaprepitant)，更优选地是福沙匹坦二甲葡胺盐(fosaprepitant dimeglumine salt)。优选地，该化合物是甲氟喹，更优选盐酸甲氟喹。优选地，该化合物是sb-657510。优选地，该化合物是p276-00。优选地，该化合物是pd-102807。优选地，该化合物是右尼古地平。优选地，该化合物是abc294640。优选地，该化合物是cgp-71683。在一个优选的实施方案中，该化合物是氨基蝶呤(cas no.54-62-6)。在进一步优选的实施方案中，该化合物是甲氨蝶呤(cas no.59-05-2)。在进一步优选的实施方案中，该化合物是夫拉平度(cas no.146426-40-6)。在进一步优选的实施方案中，该化合物是pf-04691502(cas no.1013101-36-4)。在进一步优选的实施方案中，该化合物是普拉曲沙(cas no.146464-95-1)。
11.如本文所用，术语“”是指改善或治愈疾病或与之相关的至少一种症状。因此，如果疾病或与之相关的至少一种症状得到改善或治愈，则该应被视为有效。应当理解，可能并非对所有受试者都有效。然而，根据本发明，设想将优选地在至少统计学显著部分的待受试者中有效。技术人员熟知如何确定可以有效的受试者的统计学显著部分。本领域技术人员可以使用各种众所周知的统计评估工具，例如，置信区间的确定、p值确定、学生(student
′
s)t-检验、曼-惠特尼检验(mann-whitney test)，来确定一个部分是否具有统计显著性。详细信息参见，dowdy and wearden，statistics for research，john wiley&sons，new york 1983。优选的置信区间为至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％。p值优选为0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。优选地，本发明设想的概率允许冠状病毒感染的发现对于给定组或体的至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的受试者是正确的。
12.如本文所用，术语“预防”是指避免疾病或至少一种与其相关的症状的发作，或防止疾病或所述至少一种症状的恶化。本文所述的预防通常可以在施用化合物后不久实现。然而，如果施用停止，则预防可能不会无限期地持续，而是可能在施用药物后在一定的预防时间窗口内保持存在。通常，根据本发明的预防时间窗可以是至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少7天，或至少2周或4周。然而，预防时间窗也可能取决于肽的剂量以及施用方式、制剂种类和/或施用次数。例如，如果使用高剂量，通常可以实现更长的预防时间窗。如果给予多次量也是如此。应当理解，预防可能并非对所有受试者都有效。然而，根据本发明，设想预防优选地在至少统计学显著部分的受试者中是有效的。技术人员熟知如何确定可有效预防的受试者的统计学显著部分。本领域技术人员可以使用如上所述的各种众所周知的统计评估工具容易地确定一个部分是否具有统计显著性。鉴于上述情况，预防优选地是针对冠状病毒感染的疫苗接种。
13.优选地，和/或预防包括抑制冠状病毒复制。此外，优选地，和/或预防包括抑制由所述冠状病毒引起的细胞裂解。进一步优选地，和/或预防包括抑制由所述冠状病毒引起的组织破坏，优选肺组织破坏。如技术人员所理解的，术语“抑制”包括部分抑制。因此，在可量化事件的情况下，抑制优选是所述事件减少至少25％，更优选至少50％，还更优选至少75％，最优选至少85％。如本领域技术人员将理解的，抑制还可以包括完全抑制，即防止事件或过程发生。用于确定本文指定的化合物的抑制的示例性方法，在本文的实施例中提供。
14.术语“冠状病毒”被本领域技术人员理解为涉及一组来自巢状病毒目
(nidovirales)的包膜病毒，其具有大小约2.5-3.5万碱基的正义单链rna基因组。优选地，所述冠状病毒是β-冠状病毒，更优选地是严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)-2、sars-cov-1或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)。优选地，冠状病毒是sars-cov-2。本领域技术人员理解术语“sars-cov-2”和“严重急性呼吸综合征冠状病毒2”。优选地，这些术语涉及在genbank条目ncbi：txid2697049中鉴定的病毒。由冠状病毒感染特别是sars-cov-2感染引起的症状和疾病是本领域技术人员已知的。还优选冠状病毒是sars-cov-1，或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov，ncbi：txid1335626)。
15.如本文所用，术语“受试者”是指任何种类的动物，包括例如哺乳动物、鸟类、鱼类或爬行动物。然而，通常，动物是哺乳动物，如用作宠物的哺乳动物，包括狗、猫、马，或啮齿动物、实验室动物，例如大鼠、小鼠或猿，或养殖动物如猪、牛、山羊、或绵羊。更优选地，哺乳动物是灵长类动物，最优选地是人。根据本发明的受试者应优选是已知或被怀疑患有冠状病毒感染。优选地，受试者是已知或被怀疑可被特定冠状病毒感染的动物，更优选地是人。更优选地，特别是在化合物用于冠状病毒感染的情况下，受试者已被诊断患有冠状病毒感染。
16.有利地，在本发明的基础工作中发现，本文提及的化合物在细胞培养系统中抑制sars-cov-2复制方面具有活性，使这些化合物成为和预防冠状病毒感染的候选化合物。
17.上述定义适用于对以下描述做必要的修改。以下进一步作出的附加定义和解释也适用于对本说明书中描述的所有实施方案加以必要的修改。
18.本发明进一步涉及和/或预防受试者中的冠状病毒感染的方法，包括向所述受试者施用本发明的化合物，从而和/或预防所述受试者中的所述冠状病毒感染。
19.优选地，本发明的方法是活体的体内方法。此外，它可以包括除了上面明确提到的那些步骤之外的步骤。例如，进一步的步骤可以涉及例如在步骤a)之前诊断冠状病毒感染或确定受试者对冠状病毒预防的需要，或在步骤b)中提供额外的。此外，所述步骤中的一个或多个可以由自动化设备执行。
20.除了施用本文提及的化合物之外任选施用的，优选取决于冠状病毒感染的严重程度及其症状。因此，这种额外的可以包括辅助呼吸，特别是增加氧分压、插管、人工呼吸、败血症的等的施用。此外，该组合物可以与至少一种药物化合物联合施用，该药物化合物选自：阿奇霉素(zithromycin)、利巴韦林、干扰素、托珠单抗和沙利尤单抗(sarilumab)(抗il-6单克隆抗体)、法维拉皮(favirapir)、阿比多尔、芬戈莫德、辛波莫德(siponimod)、秋水仙碱、no气体和抗生素，尤其是红霉素。
21.本发明还涉及包含容纳于外壳中的根据本发明的组合物的试剂盒。
22.如本文所用，术语“试剂盒”是指可以或不可以包装在一起的上述化合物、工具或试剂的集合。试剂盒的组分可以包含在单独的小瓶中(即作为单独部分的试剂盒)或提供在单个小瓶中。此外，应当理解，本发明的试剂盒优选用于实施上文提及的方法或用途。优选地，设想所有组分都以即用方式提供以用于实施上述方法或用途。此外，该试剂盒优选地包含用于实施所述方法或用途的说明。这些说明可以由纸质或电子形式的用户手册提供。此外，该手册可以包括使用本发明的试剂盒的施用说明和/或剂量说明。
23.优选地，该试剂盒包含稀释剂和/或施用工具(means)。合适的稀释剂如上文所述；
施用工具是适用于将化合物施用至受试者的所有工具。优选的施用工具是本领域技术人员已知的用于相应化合物的那些。施用工具可以包括用于施用化合物或组合物的递送单元，以及用于存储所述化合物或组合物直至施用的存储单元。然而，还预期本发明的工具在这样的实施方案中，可以作为单独的装置出现，并且优选地一起包装在所述试剂盒中。优选的施用工具是那些无需专业技术人员特定知识即可应用的工具。在一个优选的实施方案中，用于施用的工具是注射器，更优选带有针头，其包含本发明的化合物或组合物。在另一个优选的实施方案中，施用工具是包含化合物或组合物的静脉输注(iv)设备。在另一个优选的实施方案中，用于施用的工具是包含本发明化合物的吸入器，其中，更优选地，所述化合物被配制用于作为气雾剂施用。
24.本发明还涉及选自表1和/或表2中所示化合物的化合物在制备用于和/或预防受试者冠状病毒感染的药物中的用途。
25.本发明还涉及鉴定冠状病毒复制抑制剂的方法，包括：
26.a)在存在冠状病毒复制的候选抑制剂的情况下，将人类结肠癌细胞与冠状病毒接触，
27.b)测定步骤a)中所述人结肠癌细胞的病毒复制，
28.c)将步骤b)中测定的病毒复制与参考进行比较，以及
29.d)基于步骤c)的比较结果，鉴定冠状病毒复制的抑制剂。
30.本发明的方法是体外方法。此外，该方法可以包括除了那些特别提到的步骤之外的步骤，例如，进一步的步骤可能涉及在步骤b)中确定和/或验证病毒生长，和/或在没有提供参考的情况下并行执行步骤a)和b)的进一步步骤。优选地一些步骤，更优选地所有步骤由自动化设备辅助或执行。
31.技术人员理解术语“冠状病毒复制抑制剂”。优选地，该术语包括在指定方法中引起冠状病毒复制减少的任何和所有化合物。优选地，与不存在抑制剂即参考的测定相比，冠状病毒复制抑制剂引起冠状病毒复制至少10％，更优选至少25％，最优选至少50％的抑制。因此，在细胞活力和/或细胞复制被测量为冠状病毒复制参数的情况下，与不存在抑制剂的测定相比，冠状病毒复制抑制剂优选导致细胞活力和/或细胞复制降低至少为75％，更优选至少90％，最优选至少95％。还优选地，冠状病毒复制抑制剂的ic50值为至多50μm，更优选至多25μm，甚至更优选至多20μm。鉴于上述情况，术语“冠状病毒复制的候选抑制剂”涉及任何被怀疑为上述冠状病毒复制抑制剂的化合物。
32.术语“人结肠癌细胞”被技术人员理解为，涉及源自人结肠癌的任何培养细胞，优选细胞系。优选地，人结肠癌细胞是caco-2细胞，其可从标准细胞收集商购得。
33.如技术人员所理解的，术语“病毒复制”涉及病毒特别是冠状病毒产生的任何类型的后代基因组。优选地，该术语包括后代病毒的产生。原则上，病毒复制可以通过技术人员认为合适的任何方式来确定，例如通过确定病毒聚合酶活性、通过确定病毒基因组的数量或浓度、通过确定病毒衣壳蛋白的量等。优选地，通过确定病毒诱导的细胞毒性，优选通过确定细胞计数、细胞活力和/或细胞增殖来确定病毒复制。更优选地，确定病毒复制包括通过对未标记细胞的图片进行数字处理和/或对染的细胞核进行量化来确定所述人结肠癌细胞的增殖和/或存活力。原则上，对未标记细胞的图片进行数字处理和/或对染的细胞核进行量化的方法是本领域技术人员已知的。
34.技术人员理解术语“参考”的含义。优选地，该术语涉及在对照实验中获得的值或值的范围。如上文所述，该方法优选包括在不存在抑制剂和候选抑制剂(阴性对照)的情况下，优选在其他相同条件下孵育人结肠癌细胞的额外步骤，以确定在不存在抑制剂的情况下病毒复制的程度。因此，“参考”可以例如优选地是，在不存在抑制剂的情况下测定结束时的活细胞数量、在不存在抑制剂的情况下测定结束时可检测细胞核的数量、或在不存在抑制剂的情况下测定结束时的病毒基因组数。“参考”也可以是从早期实验中已知的预定值。还优选地，该方法包括在抑制浓度的已知冠状病毒复制抑制剂(阳性对照)的抑制剂存在下，优选在其他相同的条件下孵育人结肠癌细胞的额外步骤。还优选地，可以优选根据阴性和阳性对照的值确定参考范围或参考分数。
35.鉴于上述情况，具体地考虑了以下实施方案：
36.1.一种组合物，其包含选自表2和/或表1中所示化合物的化合物，应用于和/或预防受试者的冠状病毒感染。
37.2.根据实施方案1的应用的组合物，其中所述化合物是选自：nsc319726、聚多卡醇、安姆伐替尼(mp-470)、酪氨酸磷酸化抑制剂ag 879(ag 879)、gsk2606414、ai-10-49、vlx600、依沙维林优选盐酸依沙维林、阿沃西地(alvocidib)、、十六烷基吡啶、优选氯化十六烷基吡啶、硫鸟苷、达匹韦林(tmc120)、ly2228820(雷美替尼)、、优选盐酸、塔纳普罗吉(tanaproget)、奥替尼啶，奥替尼啶、阿米三嗪、优选甲磺酸阿米三嗪、索拉非尼、优选甲苯磺酸索拉非尼、zk-93423、硫柳汞、瑞戈非尼(bay 73-4506)、氯苄达咗、雷夫康唑、亚甲蓝、米巴帕他(mibampator)、高三尖杉酯碱、血卟啉、lgk-974、泊沙康唑、酮康唑、奈非那韦、优选甲磺酸奈非那韦、jte-013、本玛莫德(bentamapimod)、ro5126766(ch5126766)、洛那法尼(sch66336)、阿哌沙班、培西达替尼、屈他维林、lde225(nvp-lde225)、雷特格韦(erismodegib)、pfk-015、阿伐曲泊帕、3
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氟苄基螺环酮(3
′‑
fluorobenzylspiperone)、依替福辛、优选盐酸依替福辛、阿伐麦布(ci-1011)、洛匹那韦(abt-378)、dcpib、ph-797804、氟桂利嗪、依碳酸氯替泼诺、利多氟嗪、bp-897、氯康唑、优选为盐酸氯康唑、pf-670462、奥昔康唑、优选硝酸奥昔康唑、amg-9810、依匹哌唑、他匹莫德(talmapimod)、阿哆嗪、cc-223、三尖杉酯碱、盐酸巴尼地平、瓦他拉尼、osi-906(林西替尼)、伊达比星、优选盐酸伊达比星、吖啶黄、优选盐酸吖啶黄、巴司格鲁(basimglurant)、nnc-05-2090、原黄素、优选硫酸原黄素、依塞曲匹(evacetrapib)(ly2484595)、ly335979(唑喹达三盐酸盐)、普尼拉明、福沙匹坦(fosaprepitant)、优选地是福沙匹坦二甲葡胺盐(fosaprepitant dimeglumine salt)、甲氟喹、优选盐酸甲氟喹、sb-657510、p276-00、pd-102807、右尼古地平、abc294640和cgp-71683，或在优选的实施方案中选自由氨基蝶呤、甲氨蝶呤、夫拉平度、pf-04691502和普拉曲沙组成的组。
38.3.根据实施方案1或2的应用的组合物，其中所述冠状病毒是β-冠状病毒。
39.4.根据实施方案1-3中任一项的应用的组合物，其中所述冠状病毒是严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)-2、sars-cov-1或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)。
40.5.根据实施方案1-4中任一项的应用的组合物，其中所述冠状病毒是sars-cov-2。
41.6.根据实施方案1-5中任一项的应用的组合物，其中所述受试者是人。
42.7.根据实施方案1-6中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制冠状病毒复制。
43.8.根据实施方案1-7中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制所述冠状病毒引起的细胞裂解。
44.9.根据实施方案1-8中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制由所述冠状病毒引起的组织破坏，优选肺组织破坏。
45.10.根据实施方案1-9中任一项的应用的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
46.11.根据实施方案1-10中任一项的应用的组合物，其中，所述冠状病毒复制抑制剂的ic50值为至多50μm，更优选至多25μm，甚至更优选至多20μm。
47.12.一种和/或预防受试者冠状病毒感染的方法，包括向所述受试者施用实施方案1或2中指定的化合物，从而和/或预防所述受试者中的所述冠状病毒感染。
48.13.选自表1和/或表2中所示化合物的化合物在制备用于和/或预防受试者冠状病毒感染的药物中的用途。
49.14.一种试剂盒，其包含根据实施方案1-11中任一项所述的组合物，所述组合物包含在外壳中。
50.15.根据实施方案14的试剂盒，还包含稀释剂和/或施用工具。
51.16.根据实施方案14或15的试剂盒，其中所述施用工具是包含所述化合物的吸入器，优选地其中所述化合物被配制作为气雾剂施用。
52.17.一种鉴定冠状病毒复制抑制剂的方法，包括
53.a)在存在冠状病毒复制的候选抑制剂的情况下，将人类结肠癌细胞与冠状病毒接触，
54.b)测定步骤a)中所述人结肠癌细胞中的病毒复制，
55.c)将步骤b)中确定的病毒复制与参考进行比较，以及
56.d)基于步骤c)的比较结果，鉴定冠状病毒复制的抑制剂。
57.14.根据实施方案13的方法，其中所述人结肠癌细胞是caco-2细胞。
58.15.根据实施方案13或14的方法，其中所述测定病毒复制包括测定所述人结肠癌细胞的增殖和/或存活力。
59.16.根据实施方案13-15中任一项所述的方法，其中所述测定病毒复制包括通过对未标记细胞的图片进行数字处理和/或对染的细胞核进行量化来测定所述人结肠癌细胞的增殖和/或存活力。
60.本说明书中引用的所有参考文献的全部公开内容和本说明书中具体提及的公开内容均以引用方式并入本文。
附图说明
61.图1：表2的示例性化合物的剂量反应曲线；a：聚多卡醇；b：安姆伐替尼(mp-470)；c：ai-10-49；d：酪氨酸磷酸化抑制剂(ag 879)；e：塔纳普罗吉(tanaproget)；f：氯苄达咗；a)至d)是具有低ic50(＜1μm)的抑制剂的实例；e)、f)是具有中等ic50(＞1μm)的抑制剂的实例。
62.图2：实施例5和6中示例性化合物的剂量反应曲线；正方形：存活率百分比；圆圈：moi为0.1时，48小时后的感染百分比；a)安姆伐替尼；b)聚多卡醇；c)芦米司匹(luminespib)；d)沙利霉素；e)甲氨蝶呤；f)夫拉平度；g)pf-04691502；和h)普拉曲沙。
63.图3：实施例5和6中比较化合物的剂量反应曲线；正方形：存活率百分比，圆圈：moi为0.1时，48小时后的感染百分比；a)派伏司他(pevonedistat)；b)萘莫司他。
64.以下实施例仅用于说明本发明。无论如何，它们不应被解释为限制本发明的范围。
65.实施例1：方法
66.化合物收集：由外部合作伙伴(specs，荷兰)按照broad研究所(cambridge mass.usa)的建议收集5632种化合物(corsello et al.(2017)，nature medicine，23：405-408，doi：10.1038/nm.4306)。具体而言，通过lc/ms控制化合物的纯度和同一性(最低纯度＞95％)。化合物在-20℃下储存在100％dmso中。该集合有5632种独特的化合物，其中包括3400种已在600种适应症中达到临床使用的化合物，以及1582种不同程度验证的临床前化合物。有一个专业数据库，其中包含化合物、适应症、主要靶点(如果已知)和作用机制，以及有助于确定作用机制和生物靶标预测的分析工具(clue.io)。这些数据也可以通过chembl数据库获得。
67.筛选分析：根据bojkova等人(bojkova et al.(2020)，general cell biology&physiology，doi：10.21203/rs.3.rs-17218/v1)描述的方案的改编版本，确定抗病毒活性。令人惊讶且有利的是，发现caco-2细胞可用于确定冠状病毒复制，并且染细胞核的数字图像处理和/或计数可用作病毒复制的可靠替代标记。
68.细胞培养
69.从德国微生物菌种保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen und zellkulturen，dsmz；braunschweig，germany)获得源自结肠癌的人caco-2细胞。细胞于37℃在补充有10％胎牛血清(fbs)并含有100iu/ml青霉素和100μg/ml链霉素的基本必需培养基(mem)中生长。所有培养试剂均购自sigma。
70.病毒培养：如前所述，从自武汉(中国)返回法兰克福(德国)的旅行者的样本中分离出sars-cov-2病毒，并用人结肠癌细胞系caco-2培养(bojkova et al.(2020)，loc.cit.)。实验中使用的sars-cov-2储存液，在caco-2细胞上经历了一次传代，并储存在-80℃。在96孔微量滴定板中汇合的细胞中测定病毒滴度为tcid50/ml。
71.用于初步筛选和剂量反应研究的细胞活力测定：将化合物添加到96孔板中补充有2％fbs的mem中的caco-2汇合细胞层中。对于初级筛选(5632种化合物)，最终化合物浓度为10μm(最终0.1％dmso)。选定的优先化合物的剂量响应曲线，使用3次重复，每次重复有8种化合物浓度(最大20μm，最小＝xnm半对数稀释因子，最终0.1％dmso)。添加化合物后，立即以moi 0.01的sars-cov-2感染细胞。对照孔(+病毒和-病毒)也含有最终浓度为0.1％的dmso。48小时后，使用pbs中的3％pfa固定细胞，并将所述板密封和消毒以灭活sars-cov-2。使用高内涵成像(operetta cls，perkinelmer las gmbh，germany)，对病毒抑制进行量化(基于相对于对照的caco-2细胞活力)。首先，在使用数字相衬的无标签模式下，以最大对比度作为读数(vicar et al.(2019)，bmc bioinformatics，doi：10.1186/s12859-019-2880-8)。其次，对细胞核进行染(hoechst)。对于这两种读数，使用10倍物镜采集图像，每孔有9个视野，并使用制造商的软件(perkinelmer,columbus v.2.9.0.1546)进行分析。对于数字相，分析序列从细胞检测开始(方法：c；共同阈值：0.05；面积＞100μm2；分裂系数：6.5；单个阈值：0.05；对比度＞0.05)，然后计算形态、强度和位置属性以及细胞汇合度。使用activitybase(idbs，united kingdom)和r(v.3.6.1)分析孔级别的数据。相对于相应的板
内对照，将测试孔的结果进行标准化(没有病毒指定为100％抑制，有病毒指定为0％抑制)。使用标准z
′
计算，评估板水平的统计性能。
72.在48小时化合物对caco-2细胞的细胞毒性：评估了所述化合物在48小时对caco-2细胞的细胞毒性。将caco-2细胞接种在384个成像微孔板中，在达到％汇合度后，添加化合物。48小时后，使用如上所述的数字相衬读数和atp测定(cell titre-glo，promega corp)来评估细胞毒性。
73.实施例2：结果
74.表1显示了在初始筛选中显示出至少50％抑制作用的新化合物。值得注意的是，筛选中还发现了卡莫司他、硫鸟嘌呤和瑞德西韦等化合物。这些化合物也在其他筛选中被鉴定出来，并被提议在临床试验中进行研究(gordon et al.(2020)，doi.org/10.1101/2020.03.22.002386v1，li&de clercq(2020)，nat rev drug discovery 19：149)，证明该筛选方法确定了合适的冠状病毒复制抑制剂。
75.表1：对sars-cov-2有至少50％抑制作用的化合物；％inh：％抑制。
76.77.78.79.80.[0081][0082]
根据剂量反应实验，计算了测试化合物的ic50和pic50值。pic50值至少为4的化合物如表2所示。
[0083]
表2：pic50至少为4的化合物。
[0084]
[0085][0086]
实施例3：计算机辅助药物设计
[0087]
exscalate平台是目前位于欧洲的最强大的计算资源，用于支持智能计算机药物设计(由h2020-fet-hpc antarex项目共同资助)，被用于执行高性能计算(hpc)模拟，其中最终目标是选择对sars-cov-2病毒有活性的分子。从蛋白质数据库获得sars-cov-2蛋白质组主要功能单元的晶体结构；表3报告了分析的蛋白质列表，以及相应的pdb代码。生成并使用了晶体结构不可用的蛋白质的同源模型。具体地，选择了最感兴趣的sars-cov-2蛋白作为鉴定抗病毒药物的靶标。
[0088]
表3：分析的sars-cov-2蛋白质及其pdb登录号
[0089]
蛋白质pdb代码3cl蛋白酶6lu7n-蛋白6vyonsp36w02nsp6从头模型nsp96w4bnsp127bv2nsp13同源模型nsp14同源模型nsp156w01nsp166w4hpl蛋白酶6w9c刺突蛋白(spike)-ace26m0j
[0090]
对sars-cov-2蛋白进行了分子动力学模拟，以探索其活性位点的构象空间，并选择几种特别适合对接模拟的蛋白质构象。为了从化学和构象的角度优化3d结构，预定义即时查询，对蛋白质结构进行了md模拟。该结构首先通过最速下降法进行能量最小化循环，以消除所有初始空间冲突并获得开始的预平衡模型。然后对溶剂原子进行100ps受限md模拟(通常为1000kj/摩尔力常数)以平衡水分子，从而保持溶质受限。最后，执行生产运行以生成1微秒的轨迹，总共收集了20,000个轨迹。对结果进行了hpc运行后分析。
[0091]
进行高性能计算(hpc)模拟，以针对sars-cov-2蛋白虚拟筛选人类安全(sim)库(包含商业化和开发中的药物，已被证明对人体安全(＞10.000种药物))和fraunhofer的broad再利用库(包含5400种已上市药物以及具有已知作用模式的临床阶段化合物和分子)。库之间的重复在配体制备之前被删除，所有化合物都被转换为3d并使用薛定谔ligprep工具进行制备。这个过程为立体异构体、互变异构体、环状构象(默认1个稳定的环状构象)和质子化状态生成了多种状态。具体地，另一个薛定谔包epik被用于分配在选定的ph范围(ph＝7
±
1)中占主导地位的互变异构体和质子化状态。列举了不明确的手性中心，允许从每个输入结构产生最多32种异构体。然后，使用opls3力执行能量最小化。
[0092]
使用ligen
tm
(配体生成器)进行模拟，这是一种基于从头结构的虚拟筛选软件，设计和开发用于在hpc架构上运行，它代表了exscalate平台最相关的工具。ligen
tm
由一组工具组成，这些工具可以以用户定义的方式组合以生成以项目为中心的工作流程。具体地，
ligendock是一个对接模块，使用ligenscore计算评分函数，使用ligenpass和ligenpocket模块获取结合位点的3d结构。本研究中使用在ligen
tm
中采用的两种对接算法即药效对接(ligenph4)和几何对接(ligengeodock)以及计算的不同评分函数，以探索虚拟筛选(vs)的不同协议并选择在性能方面最好的一个。
[0093]
通过重新对接(如果可能)或对接已知配体来验证对接设置。当涉及互变异构体时，只选择具有最佳对接分数的一个。报告了预测蛋白质结合位点中分子的结合亲和力的对接分数值(越高越好)。
[0094]
针对主要的sars-cov-2蛋白进行了虚拟筛选，以评估这些化合物对covid-19病毒的潜在多药理作用。对应于每种蛋白质获得的对接分数的总和，还计算了每个分子的总分，并用于优先考虑最感兴趣的分子。下面的表4报告了由得分最高的分子获得的结果，选择这些分子用于进一步验证体外实验中的抗病毒活性。
[0095]
实施例4：体外筛选针对sars-cov-2的活性
[0096]
在sars-cov2 veroe6-egfp hts抗病毒试验中，测试了通过cadd分析(实施例3)选择为活性的化合物。该测试是基于对由病毒感染了组成型表达增强型绿荧光蛋白(egfp)的veroe6细胞所诱导的细胞病变效应的监测。详细地说，veroe6-egfp报告细胞系来自jnj，而用于感染的sars-cov-2是ku leuven实验室中的比利时菌株(betacov/belgium/ghb-03021/2020)。
[0097]
将测试化合物以10mm溶解在二甲亚砜(dmso)中，然后在细胞培养基中稀释至所需的终浓度。dmso的终浓度低于0.5％。然后，将化合物与384孔板中的感染有0.01 moi病毒的8000veroe6-egfp细胞/孔混合。被sars-cov2感染并用20um瑞德西韦处理的细胞用作阳性对照(100％抑制)，而被sars-cov2感染而没有瑞德西韦的细胞作为阴性对照(0％抑制)。
[0098]
在37℃孵育5天后，使用氩激光扫描显微镜记录每个孔的egfp信号。执行标准的全孔荧光板读数(自我优化方案，每384孔板约6min，4次读数/孔)，并测量测试化合物和对照孔的荧光总强度。
[0099]
还使用5x物镜进行高含量成像读数，允许一次捕获384孔板的几乎整个孔(自动聚焦在每个孔上，无像素合并(no binning)模式，1个通道)。从高含量成像中获得了两个值：
[0100]-汇合百分比：表示与对照孔相比，测试化合物孔中的veroe6-egfp细胞汇合的增加。该参数基于对发出绿荧光信号的区域的总表面的量化，因为与未处理的对照孔相比，用测试化合物处理的sars-cov-2感染孔中存在egpf阳性细胞：更高的值表示微量滴定板底面有大量细胞，小数值表示大部分荧光消失(即细胞死亡)。在附表中，我们报告了在用测试化合物处理sars-cov-2感染的细胞后达到的最大汇合度(％)。
[0101]-ic50(μm)：表示能够恢复感染的细胞病变效应的最大浓度的一半，并且是物质抑制病毒包括细胞死亡的效力的量度。它是根据在8种不同浓度下测试化合物抗病毒效果所获得的剂量反应曲线确定的。
[0102]
从测试的化合物获得的结果示于下表5中。
[0103]
与对照相比，所有测试的化合物都能够抑制病毒复制并减少病毒的细胞病变效应，具体地它们至少恢复细胞汇合度的30％。有趣的是，83种选定化合物中有50种(60％)能够恢复超过50％的细胞汇合度。
[0104]
表5：ic50和最大汇合值
[0105][0106][0107]
实施例5：calu-3感染分析和刺突(spike)蛋白免疫染
[0108]
将calu-3细胞接种在96孔板中，并孵育直到它们完全汇合。随后用所研究化合物的系列稀释液(每个浓度一式三份)处理细胞72小时，然后在含有10％fcs的mem培养基中感染。在这种预孵育之后，细胞在含有1％fcs的mem培养基中用相同的化合物稀释液处理，并在该化合物存在下用0.01 moi的sars-cov-2感染24小时。孵育24小时后，除去培养基，用丙酮/甲醇混合物(40∶60)固定细胞10分钟，然后用封闭溶液(2％bsa、5％山羊血清、0.01％硫柳汞)在4℃下封闭过夜。
[0109]
固定和封闭的细胞与抗sars-cov-2刺突抗体(兔，1∶1500，sinobiological(eschborn，germany))在37℃下孵育1小时，洗涤两次，随后与hrp-缀合的抗-兔抗体(山羊，1∶1000，jackson immunoresearch(cambridgeshire，uk))在37℃下孵育1小时。在另两个洗涤步骤后，通过添加3-氨基-9-乙基咔唑(aec)溶液对细胞染10分钟，洗涤并在bioreader-7000 f-z装置中检测刺突蛋白阳性区域的百分比。量化每个孔的刺突蛋白阳性面积百分比，并按照没有化合物的病毒对照(＝100％)将化合物处理样品的值标准化。低于或高于100％的值分别代表病毒抑制或促进。结果如图2所示；与之前描述的用于感染的化合物的比较结果显示在图3中。％值是与感染对照相比感染的细胞％。
[0110]
实施例6：calu-3细胞活力测定
[0111]
为了确定calu-3细胞的活力，在与感染分析相同的化合物稀释度下平行进行mtt分析，但不添加sars-cov-2。同时停止感染分析和细胞毒性分析，向细胞毒性板中加入25μl mtt溶液，37℃孵育4小时。加入100μl酸化十二烷基硫酸钠(sds)(870mm，ph4.7，水∶dmf＝50
∶50)，平板在37℃下孵育过夜。参考波长为620nm，使用tecan genios basic测量在560nm处的吸光度。为了计算细胞活力，将所有吸光度值减去空白，将未处理细胞的值设置为100％，并将化合物处理的样品与它们相关联。结果如图2所示；与前面描述的用于感染的化合物的比较结果显示在图3中。活力值以活力对照为100％进行标准化。
[0112]
参考文献
[0113]-bojkova et al.(2020)，general cell biology&physiology，doi：10.21203/rs.3.rs-17218/v1
[0114]-corsello et al.(2017)，nature medicine，23：405-408，doi：10.1038/nm.4306
[0115]-gordon et al.(2020)，doi.org/10.1101/2020.03.22.002386v1
[0116]-kupferschmidt&cohen(2020)，science 367：1412，doi：10.1126/science.367.6485.1412
[0117]-li&de clercq(2020)，nat rev drug discovery 19：149
[0118]-vicar et al.(2019)，bmc bioinformatics，doi：10.1186/s12859-019-2880-8
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]

技术特征：

1.一种组合物，其包含选自表2和/或表1中所示化合物的化合物，应用于和/或预防受试者的冠状病毒感染。2.根据权利要求1的应用的组合物，其中所述化合物选自：ly2228820、nsc319726、聚多卡醇、安姆伐替尼(mp-470)、酪氨酸磷酸化抑制剂ag 879(ag 879)、gsk2606414、ai-10-49、vlx600、依沙维林优选盐酸依沙维林、阿沃西地、、十六烷基吡啶优选氯化十六烷基吡啶、硫鸟苷、达匹韦林(tmc120)、优选盐酸、塔纳普罗吉、奥替尼啶优选奥替尼啶、阿米三嗪优选甲磺酸阿米三嗪、索拉非尼优选甲苯磺酸索拉非尼、zk-93423、硫柳汞、瑞戈非尼(bay 73-4506)、氯苄达咗、雷夫康唑、亚甲蓝、米巴帕他、高三尖杉酯碱、血卟啉、lgk-974、泊沙康唑、酮康唑、奈非那韦优选甲磺酸奈非那韦、jte-013、本玛莫德、ro5126766(ch5126766)、洛那法尼(sch66336)、阿哌沙班、培西达替尼、屈他维林、lde225(nvp-lde225)、雷特格韦、pfk-015、阿伐曲泊帕、3
’‑
氟苄基螺环酮、依替福辛优选盐酸依替福辛、阿伐麦布(ci-1011)、洛匹那韦(abt-378)、dcpib、ph-797804、氟桂利嗪、依碳酸氯替泼诺、利多氟嗪、bp-897、氯康唑优选盐酸氯康唑、pf-670462、奥昔康唑优选硝酸奥昔康唑、amg-9810、依匹哌唑、他匹莫德、阿哆嗪、cc-223、三尖杉酯碱、盐酸巴尼地平、瓦他拉尼、osi-906(林西替尼)、伊达比星优选盐酸伊达比星、吖啶黄优选盐酸吖啶黄、巴司格鲁、nnc-05-2090、原黄素优选硫酸原黄素、依塞曲匹(ly2484595)、ly335979(唑喹达三盐酸盐)、普尼拉明、福沙匹坦优选福沙匹坦二甲葡胺盐、甲氟喹优选盐酸甲氟喹、sb-657510、p276-00、pd-102807、右尼古地平、abc294640、环孢菌素和cgp-71683。3.根据权利要求1或2的应用的组合物，其中所述冠状病毒是β-冠状病毒。4.根据权利要求1-3中任一项的应用的组合物，其中所述冠状病毒是严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)-2、sars-cov-1或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)。5.根据权利要求1-4中任一项的应用的组合物，其中所述冠状病毒是sars-cov-2。6.根据权利要求1-5中任一项的应用的组合物，其中所述受试者是人。7.根据权利要求1-6中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制冠状病毒复制。8.根据权利要求1-7中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制所述冠状病毒引起的细胞裂解。9.根据权利要求1-8中任一项的应用的组合物，其中所述和/或预防包括抑制由所述冠状病毒引起的组织破坏，优选抑制肺组织破坏。10.根据权利要求1-9中任一项的应用的组合物，其中所述组合物是药物组合物。11.根据权利要求1-10中任一项的应用的组合物，其中所述冠状病毒复制抑制剂的ic50值为至多50μm，更优选至多25μm，甚至更优选至多20μm。12.一种试剂盒，其包含根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，所述组合物包含在外壳中。13.根据权利要求12所述的试剂盒，还包含稀释剂和/或施用工具。14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其中所述施用工具是包含所述化合物的吸入器，优选地其中所述化合物被配制作为气雾剂施用。15.一种鉴定冠状病毒复制抑制剂的方法，包括：a)在存在冠状病毒复制的候选抑制剂的情况下，将人类结肠癌细胞与冠状病毒接触，
b)测定步骤a)中所述人结肠癌细胞中的病毒复制，其中所述测定病毒复制包括通过对未标记细胞的图片进行数字处理和/或对染的细胞核进行量化来测定所述人结肠癌细胞的增殖和/或存活力，c)将步骤b)中确定的病毒复制与参考进行比较，以及d)基于步骤c)的比较结果，鉴定冠状病毒复制的抑制剂。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述人结肠癌细胞是caco-2细胞。

技术总结

本发明涉及包含选自表1和/或表2中所示化合物的化合物的组合物，其应用于和/或预防受试者的冠状病毒感染。本发明还涉及与所述组合物相关的方法和用途。组合物相关的方法和用途。

技术研发人员：

P

受保护的技术使用者：

弗劳恩霍夫应用研究促进协会

技术研发日：

2021.04.01

技术公布日：

2022/12/12