一种尿酸酶纳米花反应器及其制备方法与流程

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1.本发明属于医药领域，具体涉及一种用于痛风、高尿酸血症的尿酸酶纳米花反应器。

背景技术：

2.血液中的尿酸浓度过高会引起痛风、高尿酸血症，形成痛风石。采用固定化尿酸酶进行血液灌流是降低血液中尿酸浓度的有效方式之一。国内较常用的尿酸酶固定化载体主要是聚苯乙烯、活性炭、磁性吸附珠等等，固定化过程较为复杂，且酶活性的损耗较大。
3.中国专利cn110564717a公开了一种热稳定性提高的碱性果胶酶-无机杂化纳米花，该杂化纳米花由碱性果酶pel3与cu3(po4)2共结晶形成，制备步骤包括：在磷酸盐缓冲液中加入终浓度为8mm的可溶性金属离子cu
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，同时加入终浓度为0.02mg/ml的碱性果胶酶pel3，摇匀后孵育。但该方法提高pel3浓度后形成的纳米结构呈球形，没有明显的多瓣花状形成，这使得制备杂化纳米花会产生大量的废水。

技术实现要素：

4.基于上述现有技术，本发明的目的在于提供一种尿酸酶纳米花反应器及其制备方法。
5.本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：
6.一种尿酸酶纳米花反应器，：所述尿酸酶纳米花反应器通过包括以下步骤的方法制备得到：
7.(1)将硫酸铜溶液与ph值为7～8的磷酸盐缓冲液混合，得到硫酸铜浓度不低于10wt％的基液；
8.(2)按尿酸酶浓度≥0.1mg/ml，向基液中加入尿酸酶，然后在5℃以下反应，得到所述尿酸酶纳米花反应器。
9.优选地，磷酸盐缓冲液的ph值为8。在该条件下能获得最佳的产量和酶活。
10.优选地，步骤(1)中，基液中硫酸铜的浓度为12wt％。
11.优选地，步骤(2)中，尿酸酶的浓度为0.2～0.3mg/ml。
12.优选地，步骤(2)的反应时间为72小时。
13.一种尿酸酶纳米花反应器的制备方法，包括以下步骤：
14.(1)将硫酸铜溶液与ph值为7～8的磷酸盐缓冲液混合，得到硫酸铜浓度不低于10wt％的基液；
15.(2)按尿酸酶浓度≥0.1mg/ml，向基液中加入尿酸酶，然后在5℃以下反应，得到所述尿酸酶纳米花反应器。
16.优选地，磷酸盐缓冲液的ph值为8。
17.优选地，步骤(1)中，基液中硫酸铜的浓度为12wt％。
18.优选地，步骤(2)中，尿酸酶的浓度为0.2～0.3mg/ml。
19.优选地，步骤(2)的反应时间为72小时。
20.与现有尿酸酶的常规固定化方法相比，本发明尿酸酶纳米花反应器的制备过程简单，酶的催化效率和酶活的稳定性均得到很大的改善。
附图说明
21.图1为本发明尿酸酶纳米花反应器的扫描电子显微镜图片。
22.图2为本发明尿酸酶纳米花反应器的xrd图。
具体实施方式
23.以下结合实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。
24.实施例1
25.所需的药品：
26.cuso4溶液，尿酸酶干粉，ph＝8.0磷酸盐缓冲(pbs)溶液
27.所需的仪器：
28.摇床，烧杯，离心机，020微孔膜
29.制备过程：
30.将cuso4溶液加入烧杯中，接着加入pbs溶液，混匀，混合溶液的总体积为1000ml，混合液中cuso4的浓度为12％，磷酸盐的总摩尔浓度为0.2mol/l。然后加入300mg的尿酸酶干粉，将烧杯置于摇床，在4℃的温度下反应72小时，用020微孔膜过滤，滤渣再用离心机(转速4000/min)离心分离，将蓝沉淀物分离出来，沉淀物约20g。沉淀物的形貌如图1所示，呈纳米花状。
31.图2的xdr图显示该纳米花是cu
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离子为骨架的尿酸酶纳米花，是无机-有机杂化尿酸酶纳米花。在有机-无机杂化纳米花生长初期，铜离子通过静电相互作用附着在带负电荷的磷酸基团上，形成金属磷酸盐纳米晶体；酶具有“胶水”作用，将纳米晶体结合在一起，形成花瓣状的初级纳米板；这些纳米板进行自组装，并不断生长直到饱和，形成有机-无机杂化纳米花，最终使尿酸酶得到有效固定。
32.尿酸分解实验：
33.将10g的蓝沉淀物(即纳米花)装填在8μm的玻璃纤维柱中，使其分解2000ml的血浆中的尿酸。结果如下表1所示：
34.表1血浆中的尿酸下降值
35.0ml过滤前过滤后500ml629μmol《29μmol1000ml621μmol《29μmol1500ml630μmol《29μmol2000ml622μmol63μmol
36.由实验结果可以看出，10g的尿酸酶纳米花在持续过滤2000ml的血浆后，对分解血浆中的尿酸仍然有用。
37.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可
以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.一种尿酸酶纳米花反应器，其特征在于：所述尿酸酶纳米花反应器通过包括以下步骤的方法制备得到：(1)将硫酸铜溶液与ph值为7～8的磷酸盐缓冲液混合，得到硫酸铜浓度不低于10wt％的基液；(2)按尿酸酶浓度≥0.1mg/ml，向基液中加入尿酸酶，然后在5℃以下反应，得到所述尿酸酶纳米花反应器。2.根据权利要求1所述的尿酸酶纳米花反应器，其特征在于：磷酸盐缓冲液的ph值为8。3.根据权利要求1所述的尿酸酶纳米花反应器，其特征在于：步骤(1)中，基液中硫酸铜的浓度为12wt％。4.根据权利要求1所述的尿酸酶纳米花反应器，其特征在于：步骤(2)中，尿酸酶的浓度为0.2～0.3mg/ml。5.根据权利要求1所述的尿酸酶纳米花反应器，其特征在于：步骤(2)的反应时间为72小时。6.一种尿酸酶纳米花反应器的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将硫酸铜溶液与ph值为7～8的磷酸盐缓冲液混合，得到硫酸铜浓度不低于10wt％的基液；(2)按尿酸酶浓度≥0.1mg/ml，向基液中加入尿酸酶，然后在5℃以下反应，得到所述尿酸酶纳米花反应器。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：磷酸盐缓冲液的ph值为8。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，基液中硫酸铜的浓度为12wt％。9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，尿酸酶的浓度为0.2～0.3mg/ml。10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)的反应时间为72小时。

技术总结

本发明公开了一种尿酸酶纳米花反应器。所述尿酸酶纳米花反应器通过包括以下步骤的方法制备得到：(1)将硫酸铜溶液与pH值为7～8的磷酸盐缓冲液混合，得到硫酸铜浓度不低于10wt％的基液；(2)按尿酸酶浓度≥0.1mg/ml，向基液中加入尿酸酶，然后在5℃以下反应，得到所述尿酸酶纳米花反应器。与现有尿酸酶的常规固定化方法相比，本发明尿酸酶纳米花反应器的制备过程简单，酶的催化效率和酶活的稳定性均得到很大的改善。到很大的改善。到很大的改善。