清洗液（酸液）的配方:
| 弱 | 次强 | 强 |
重铬酸盐（g） | 100 | 120 轴承起拔器 | 63 |
浓硫酸（ml） | 100 | 200 | 1000 |
蒸馏水（ml） | 100 | 1000 | 200 |
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较常用的为次强酸，新配制呈红，经多次使用或遇有机溶剂呈绿，表示清洁液已失效，需要配。
塑料及橡胶制品的处理：
1．先煮沸5min以上
2．用自来水清洗12遍以上
3．用双蒸水荡洗3遍以上
4．烘干
5．与玻璃器皿一起灭菌
96孔板清洗:
1．泡酸24-48hr（尽量没在酸液中）
2．捞出，用自来水冲洗12遍（注意冲洗每个孔）
3．双蒸水荡洗3遍
4．低温烘干（50摄氏度以下，且板要倒扣）
5．将板及盖照紫外3h
6．放置无菌室备用
另法:泡酸缸1h,自来水冲20遍,双蒸水冲10变,与pe手套\保鲜膜\皮筋一起照紫外一晚上,包装待用.
1．成分（DMEM）：培养基干粉（1包/升），碳酸氢钠（据培养基袋口的说明加，经验值2g/l），青霉素（0.06g（10万u）/l），链霉素（0.1g（10万u）/l）
注意：
1．所用双蒸水需要新鲜烧的，因为放置过久的双蒸水PH值变化
2．先溶解碳酸氢钠，再溶解双抗，最后加入培养基干粉
3．过滤除菌的滤膜为0.22um，在滤膜上方可放置一张滤纸进行粗滤，使用前先灭菌处理
4．小牛血清在开封之前需经过灭活，156摄氏度水浴30min，由于血清本来就是无菌的，所以无需过虑除菌（所剩的血清都已经灭活了，后购买的需先灭活再用）
消化液配制：
1．成分：0.25g胰蛋白酶，0.02gEDTA，100mlPBS；
2．先把EDTA溶于100ml的PBS中，再加入胰蛋白酶，定容到100ml；
注意：
1．先加热溶解EDTA
2．再加入胰蛋白酶，混匀
3．0.22um滤膜过滤除菌
冻存液配制：
1．70%的基础培养基（不含血清），20%的血清，10%的DMSO
2．可以不加70%的培养液就加血清和10%DMSO，现配现用，加入细胞沉淀中 3．用轻轻混匀后分装于冻存管（2ml），一般最多只能加入1ml的细胞悬液，这样有利于复苏的存活率，然后逐步降温，步骤为：
1．4摄氏度放置30min
2．-20摄氏度放置1hr
3．-70摄氏度放置3hr以上（或过夜）
4．迅速转移至液氮中（放置在事先作好的纱布袋中，并做好标记，包括冻存细胞的名称、冻存时间和数量）
注：液氮罐须定期检查（每半个月或1个月检查1次），若液氮高度低于罐高的1/3，须及时补充液氮，并做好记录，以便下次估计充氮时间。
MTT溶液配制（四甲基偶氮唑盐）
浓度5mg/ml，将称好的MTT加入PBS溶液，震荡混匀溶解后用0.22um孔径的滤膜过滤除菌，4 摄氏度保存，由于MTT见光氧化，故在瓶外包纸避光保存。
PBS溶液配制:
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g(Na2HPO破真空阀4.12H2O 2.9g)
KH2PO4 0.2g
双蒸水定容到1L，调PH7.2-7.4
(杨艳丽:
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4.12H2O 3.58g
KH2PO4 0.24g
双蒸水 先抽滤 再灭菌)
洗瓶：
1．烘干（如果是干的可以免去烘干这一步）
2．泡酸24hr以上
3．酸缸中拿出清水冲洗，直至黄退去虚拟墓地
4．用刷子清洗器皿一遍，然后清水冲洗5-6遍（理论10遍以上）
5．单蒸水冲洗5-6遍
6．双蒸水冲洗5-6遍
7．烘干
8．玻璃器皿有盖的盖上（松弛便于蒸汽进入），用牛皮纸或报纸封住瓶口，放入高压灭菌锅内灭菌，无盖的玻璃器皿，用锡纸包住瓶口，再套牛皮纸，最后放入高压锅（121摄氏度，20min） 9．将器皿放入烘箱，烘干（如果来不及可以省略，最后烘一遍）
10．放入细胞培养室，归类。
清洗盖子：用清水冲洗瓶盖，干净后放入沸水中煮沸10min，晾干（不要放入烘箱中或高压锅内）
细胞复苏:
(细胞房用之前要去紫外灯照射30min)
1．先从液氮罐内迅速拿出需要复苏的细胞，迅速放入37摄氏度的水浴中，并不停的摇晃，注意瓶口不要碰到水面，以防污染细胞；
2．将盛入37摄氏度水浴中的细胞连同烧杯一起带入细胞房，待细胞均匀融化后，拿出；
3．将细胞悬液倒入离心管，加入3-4滴完全培养基，放入离心机中离心1500转（调两档），3-4min，观察细胞沉淀情况，如果太少，再次离心3-4min； 4．将离心管拿出，倒掉上清液，在离心管中加入2滴培养液，并用弯头滴管伸入液面以下不断吹打（注意不要将弯头伸出液面，以防有气泡产生，影响细胞生长）；
5．将新的细胞培养瓶中加入两滴管培养液，再将离心管中的细胞转入新的细胞培养瓶（以
防加入时产生气泡）并使细胞散步均匀；
6．用酒精擦拭瓶身，显微镜观察细胞形态（有透明的圆的细胞漂浮其中），培养瓶上写明日期及培养细胞的名称；
7．将培养瓶的盖子稍松，放入CO2培养（便于CO2进入）待第二天观察（细胞一般4小时贴壁）；
8．清理超净台，用酒精擦拭培养液的瓶身，并放入冰箱内保存，并将其它物品归类。若有下个同学要用超净台，可打开三盏紫外灯，并快速离开；
9．将物品通过传送间带出细胞房。
细胞传代:
1.从CO2培养箱中取出细胞，放于显微镜下观察，如果细胞已长满瓶底的80%，则需传代；
2.将旧的培养剂倒去，加入胰酶2ml，轻轻荡洗瓶底，将死细胞及其一些细胞代谢物除去，
发现细胞开始回缩但不脱离瓶底，然后倒去胰酶；
小型地源热泵
3.再向培养瓶内加入2ml胰酶，并放入CO2箱中消化2min，拿出后显微镜观察细胞的形态变化，发现细胞质固缩，细胞间隙增大后，立即停止消化；
4.加入新的培养基2ml，用滴管从一侧到另一侧，反复多次后，于显微镜下观察，发现细胞基本漂浮于液面上（抑制胰酶消化）；
5.将培养瓶内的液体吸入离心管内，1500rpm，3min，弃去上清（去胰酶）；
6.加入新的培养基3ml于离心管，用滴管吹打均匀，使细胞基本散开不聚集；
7.新的培养瓶内各加入2ml新的培养基，据细胞的生长状况吸取细胞（生长快的少吸些，生长慢的多吸些），将离心管内的细胞分装于两个新的培养瓶内；
8.显微镜观察，标记，酒精擦拭，放入箱中前稍拧松盖子，于CO2培养箱中培养。
细胞冻存：
1.将旧的培养基倒去；
2.吸取3ml胰酶，加入细胞培养瓶中，轻轻荡洗一下，倒掉；
3.吸取2ml胰酶，加入细胞培养瓶中，放入CO2培养箱，2min，取出，显微镜下观察细胞生长状况；
4.加培养液3ml于培养瓶内，用滴管反复吹打；
5.吸取培养瓶内的细胞于离心管中，1500rpm，3min；
6.倒掉上清液，加冻存液1ml，吹打混匀，吸取入冻存管中；
7.冻存管先放置于4度30min，-20度1h，-70度过夜。
（冻存液的配制：90%小牛血清，10%DMSO）
Western:
TGFb+18%(15%)过硫酸铵
→固定胶的板槽 涂抹凡士林(防漏胶)
→于250ml小烧杯中,配18%分离胶 用头搅匀
→固定玻板,倒入分离胶 \
浓缩胶
分离胶
(加水,用针头压平液面，再倒出水)（10：00-10：40等待胶凝固）
→加入浓缩胶
→冰箱中取样
→加入上样buffer(5*SDS)（溴芬兰、ED、甘油…）,离心
→水煮沸
→样品在沸水中变性4min
→取出样品 离心
→将凝固的胶转入电泳槽
→以微量注射器上样
→(电泳槽漏)加满电极液 电流偏大(防气泡)(所有孔都加满,使跑出电泳条带平整)
1*SDS | 1*SDS | 1*SDS | 5*SDS | 5*SDS | 5*SDS | MARKER | 1*SDS | 1*SDS | 1*SDS |
| 锁架 | | | | | | | | | |
(上不同样品时电极液洗针)
（甘油含量高，样品沉积快，故一般加样20ul，多加甘油可加大上样量至30ul，marker -70度 10ul）弹性垫片
电压计：80-120V
（40min-1h 分离胶；2-3h 浓缩胶）
→准备大平皿,加入转印buffer
→取出胶
→切胶（切充分，有蓝转膜麻烦）
（MC易染；PBDF膜）
（蛋白结合牢固程度：小分子用干法，大分子用湿法）
（<20kb,0.22膜）
→剪膜 泡甲醇15s 水2min
→剪滤纸 泡转印buffer 30min
→ 滤纸
滤膜
胶
滤纸
→夹子夹好
→放入槽中转印（I=200A t=2.5hr）
→放入脱脂奶粉封闭
→TBST洗5min
→加抗体
→曝光
