关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化. 一、菌体的裂解
1、怎样裂解细菌？
2、表达重组蛋白时，细菌裂解方法都有哪些？光纤法兰
3、酵母的破碎
5、如何鉴定细菌超声破碎的程度
6、细菌裂解的DNaseI
7、超声裂解细菌是否完全？
二、包涵体的洗涤
1、包涵体的洗涤问题
2、如何得到比较纯的包涵体
三、关于包涵体的溶解：
1、请教GST包涵体溶解
2、包涵体的溶解
3、有关包涵体的溶解问题
4、8M尿素溶解的包涵体溶液应如何保存?
5、8M尿素溶解的包涵体溶液在室温下可以放多久而不出现问题?
6、GST融合蛋白形成包含体不溶，咋办？
四、包涵体的复性
1、包涵体如何复性
2、包涵体的复性2
3、包涵体复性3
4、SOS!!各位包涵体复性高手
5、大家来谈谈包涵体复性问题
6、包涵体复性形成聚集物
7、复性中蛋白析出！
8、包涵体复性液配方
9、什么叫复性成功
10、怎样鉴定融合蛋白复性是否成功
五、包涵体的纯化
复性以后的蛋白质的纯化策略与可溶性蛋白质相似，这里不再赘述。（注：当然也可以先纯化然后再复性———一般多采用凝胶柱，或者纯化与复性同步进行———比如柱上复性。）
热转印印刷机六、综述以及其他
1、蛋白复性和纯化在线资料
2、综述
1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。
2.玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。
3.超声波处理法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，在1KG至10KG频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施，时间以及超声间歇时间、超声时间可以自己调整，超声完全了菌液应该变清亮，如果不放心可以在显微镜下观察。对超声波及热敏感的蛋白和核酸应慎用。
4.反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
5.化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好，我用的浓度一般为1mg/ml。
无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且应该在破碎的同时多加几次；另外，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。
超声破碎的条件选择
超声破碎的条件不能一概而论，要看你的实验要求，有的是细菌破碎，有的是对组织细胞进行破碎，要掌握好功率和每次超声时间，功率大时，每次超声时间可缩短，不能让温度升高，必要时在冰浴条件下进行超声破碎。至于每次超声时是否起泡沫到不是关键的问题，这与你超声的量明显有关。
包涵体的洗涤问题
通常的洗涤方法一般是洗不干净的，我以前是这么做的，先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分，过滤除去未溶解的物质，注意留样跑电泳，然后用水稀释到4M，离心把沉淀和上清分别跑电泳，如此类推可以
一直稀释到合适的浓度，你可以到一个合适去除杂质的办法，其实这就是梯度沉淀的方法，我觉得比通常的直接洗脱效果好
下列方法已在本实验室验证，复性任何包涵体，必定能得到目的蛋白：
菌体为超声法裂解，裂解溶液中含
50mM Tris-HCl, pH 8.0，
100mM NaCl，
5mM EDTA，
0.1% NaN3，
槽钢加工>对等网线0.5% Triton-X100，
在使用前加入0.1mM PMSF
每250毫升裂解液中加入约50克菌体，工作15s，间隔15秒，超声破碎45分钟，超声后加入10mM MgSO4 和0.1mg/ml 的溶菌酶和Dnase 0.01mg/ml，室温放置20分钟，6000RPM离心15分钟，保留
沉淀。
再次加入裂解液，超声破细胞后，加溶菌酶和Dnase, 上述过程重复三次。
用下述的溶液将包涵体悬浮，离心收集包涵体。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3
用下述溶液悬浮包涵体，离心收集包涵体。
50mM Tris-HCl, pH 8.0
100mM NaCl
5mM EDTA
0.1% NaN3
1M 尿素
如暂时不用，放入－20℃保存。
包涵体的溶解
将包涵体悬浮在下述溶液中，4℃振荡过夜。
100mM Tris
50mM Glycine
8.5M 尿素
溶液用HCl调节到pH 8.0后加入
25mM DTT
6000RPM离心，取上清，去除不溶解物。
包涵体蛋白的复性
将溶解的包涵体装入透析袋，在4℃下将透析袋浸入下列溶液依次透析：
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
4M 尿素溶液pH调节到8.0
透析24小时
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
2M 尿素溶液pH调节到8.0
透析24小时
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
1M 尿素溶液pH调节到8.0
透析24小时
0.1M Tris
0.4M L-Arginine
1 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素溶液pH调节到8.0
透析24小时
0.025M Tris
0.1M L-Arginine
0.25 mM EDTA
0.2mM PMSF
0 M 尿素溶液pH调节到8.0
透析24小时
10mM Tris-HCl pH8.0
太空风洞150mM NaCl,
1mM EDTA
0.02% NaN3.塑木型材
透析24小时
透析时注意透析袋的截留分子量
下面的工作就简单了，因为复性的蛋白已经在生理缓冲液中，进行阴阳离子交换层析爱怎么整就怎么整它了。
