一、实验目的:
了解过氧化氢酶的作用,掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法;
二、实验原理:
过氧化氢酶是一类素蛋白,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。
R(Fe+2)2+H2O2---R(Fe+3OH)2
R(Fe+3OH)2+ H2O2 ---- R(Fe+2)2+2H2O+O2
并合上式:H2扫频信号源O2 ----2H2O+O2
据此,可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液,经酶促反应后,加入过量的经络油
KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定, 根据Na2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。
三、实验材料、仪器和试剂:
1、实验材料:小白菜
2、仪器:恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶
3、试剂:
(1)0.05mol/L H2O2 (2) 2mol/LH2SO4
(3)0.1mol/L Na2S2O3
(4)1%淀粉溶液 (5)10%(NH4)6Mo7O24 (6)pH7.8的磷酸缓冲液 (7)20% KI
(8)CaCO3
四、实验步骤:
(1)酶液提取:
称取2.5g白菜叶,加少量CaCO3,2mLpH7.8的缓冲液少量,研成匀浆,移入100ml容量瓶,用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容,静置10分钟,过滤。取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测(根据酶活高低而定)。
(2)酶促反应:
取锥形瓶4个,编好号各加入10ml酶液之后,立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL,终止酶活性,作空白对照。向另外两瓶各加H2O2 5mL,摇匀,在加入H2O2的那一刻起,记录时间,5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL,终止酶活性。向三角瓶中加蓝牙GPS1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24,摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄,加入1mL1%淀粉指试剂,蓝恰好消失,记录消耗的Na2S2O3的体积V0,V;
五、结果记录与数据处理:
被分解的H2O2量(mg)=(空白滴定值-样品滴定值)×Na2S2O3摩尔浓度×17
过氧化氢酶活性(mg.g-1.min健康养生杯-1)=
六、 结果分析与问题讨论:
实验十 还原型VC含量测定
一、实验目的
学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。
学会测定维生素C含量的原理和方法,进一步掌握滴定法的基本操作技术.
二、实验原理
Vc由于其结构中具有烯二醇的结构,所以它是一种强还原剂,易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定,但易被热、光及某些金属离子破坏。
本实验是用碘液作氧化剂,淀粉为指示剂,当Vc全部被氧化后,过量一滴碘液与淀粉指示
剂反应生成淡兰络合物,即为终点。
三、实验材料、试剂及仪器
材料:西红柿。
试剂:
2%草酸溶液:称取20g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀; 1%可溶性淀粉溶液:称取摄像头识别1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆,倾入80 mL的沸水中继续煮沸至透明,冷却后稀释至100 mL;
0.1mol/L碘液(随用随配):称取6.5克碘和20克碘化钾于研钵中,加少量的蒸馏水研磨至完全溶解后稀释至500毫升混匀。贮存于棕试剂瓶中;
1%草酸溶液:称取10g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;
0.1mg/mLVc标准溶液:准确称取抗坏血酸10mg,溶于1%草酸溶液中稀释至100mL贮存于棕试剂瓶中冷藏(现用现配)。
仪器:万分之一电子天平;棕酸式滴定管;三角瓶等。
四、实验操作步骤:
1、碘液的标定:吸取0.1mg/mLVc标准溶液10mL于100mL的锥形瓶中,加5滴可溶性淀粉,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝,且30秒内不退,即为终点。滴二个平行样。
2、样品的提取:准确称取10g左右的样品1份,
用少许2%草酸溶液研磨成匀浆,转入100mL容量瓶中,用2%的草酸溶液洗研钵3-4次,一并转入容量瓶中,最后用2%草酸溶液定容至100mL摇匀,放置10分钟后过滤,滤液备用。
内衣生产3、滴定:
空白滴定: 准确吸取10mL2%草酸溶液于100mL的锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝,且30秒内不退,即为终点,滴二个平行样。
样品滴定: 准确吸取10mL样品于100mL的锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀
碘液滴定至浅蓝,且30秒内不退,即为终点,滴二个平行样。
六、数据记录及计算
1、样品的重量(g):样品1:W1 =
样品2:W2 =
2、碘液的标定(mL): V1 = V2=
=
3、样品的滴定(mL):
4、空白的滴定(mL):
5、计算:
每毫升碘液相当于Vc的毫克数K(mgVc/mLI2)=
Vc的含量(mg/100g 样品)=
六、结果分析与讨论