实验六 过氧化物酶活性测定

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实验六  过氧化物酶活性测定
一、实验目的 
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。通过本实验了解过氧化物酶的作用,掌握愈创木酚法测定过氧化物酶。
二、实验原理 
在过氧化物酶(POD)催化下,H2O2将愈创木酚氧化成茶褐产物。此产物在470 nm处有最大光吸收值,故可通过测470 nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。 
四、设备与试剂 
分光光度计,TDL-5000B型低速冷冻多管离心机(R=18cm),研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管。0.05mol·L-1的磷酸缓冲液(pH5.5),0.05 mol·L-1愈创木酚溶液,2% H2O2。 
五、实验步骤 
(一)酶液的制备 
1.05.0g洗净去皮的马铃薯块茎,切碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中,于3000×g离心10min车头时距,上清液转入25mL容量瓶中。沉淀用5mL看门狗芯片磷酸缓冲液再提取两次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用。 
(二)过氧化物酶活性测定 
酶活性测定的反应体系:依次加入2.9mL0.05mol·L-1磷酸缓冲液;1.0mL2H2O21.0mL 0.05mol·L-1愈创木酚和 0.1mL 酶液。用加热煮沸 5min 的酶液为对照,反应体系加入酶液后,立即于 34℃水浴中保温 3min,然后迅速稀释 1倍,470nm 波长下比,每隔1min记录1次吸光度A470,共记录5次,然后以每分钟内A470变化0.011个酶活性单位(U)。 
六、实验结果 
以每分钟内A470变化0.011个过氧化物酶活性单位(U)。
W——马铃薯鲜重(g); 
t——反应时间(min); l型匹配
VT——提取酶液总体积(mL); 
VS——测定时取用酶液体积(mL)。 
七、注意事项 
酶液的的提取过程要尽量在低温温条件下进行。H2O2要在反应开始前加,不能直接加入。引向器
实验七  过氧化氢酶活性的测定
一、实验目的 
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中,其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系,故常加以测定。熟悉过氧化氢酶活性的不同测定方法。 
二、实验原理 
滴定法:过氧化氢酶(CAT)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据 H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢,即可求出消耗的H2O2的量。 
5H2O2抽纸盒+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 
氧电极法:过氧化氢在过氧化氢酶的作用下,放出氧气,其放氧量与过氧化氢酶的活性成正比。放出的氧可用氧电极定量测定。
磷酸盐缓冲液(pH7.0) 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml,用水稀释至100ml,即得。
pm2.5治理
磷酸盐缓冲液(pH7.8):取磷酸氢二钠35.9g,加水溶解,并稀释至500ml。
已液:取磷酸氢二钠2.76g,加水溶解,并稀释至100ml。取甲液91.5,乙8.5混合 得

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