[原理]
过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过 程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。 据此，可根据H202的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液，经过酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 [仪器和用具]
研钵；三角瓶50ml4个；10ml酸式滴定管；恒温水浴锅；容量瓶25ml1个。
[试剂]
10％H2SO4； 0．2molL-1磷酸缓冲液; 0．1molL-1高锰酸钾标准液；称取KmnO4(AR)克，用新煮沸泠却的蒸馏水配制成1000ml,用草酸溶液标定； ：市售30％H202大约等于17．6m0
1L-1，取30％H202溶液5．68ml,稀释至于1000ml,用标准溶液（在酸性条件下）进行标定 草酸：称取优级纯用蒸馏水溶解后，定容至1L。
[方法]
碳纤维加热膜
1．酶液提取：取小麦叶片2．5g加入的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rmin-1离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2．取50ml三角瓶4个(2个测定，2个对照)，测定瓶中加入酶液，对照瓶中加入煮死酶液，再加入，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％
3．用L-1KMnO4标准溶液滴定H202，至出现粉红(在30min内不消失)为终点。
硅棒 4．结果计算：酶活性用每克鲜重样品1min内分解H202的毫克数表示： 酶活（）=
式中 A--对照KMn04滴定毫升数(ml)
B----酶反应后KMnO4滴定毫升数（ml）
VT----酶液总量（ml）;
V1----反应所用酶液量（ml）
W-----样品鲜重（g） 的KMnO4相当于.
注意 所用KMnO4溶液及H2O2溶液临用前要经过重新标定。
三、过氧化氢酶的活性----紫外吸收法
[原理]
H202在240nm波长下有强吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。根据测量吸光的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
[仪器与用具] 紫外分光光度计；离心机；研钵；容量瓶250ml1个；刻度吸管支；2ml1支；10ml试管3支；恒温水浴锅。
[试剂]
总线上的音频设备L-1pH7．8磷酸缓冲液(内含1％聚乙烯吡咯烷酮)；0．1molL-1H202(用0．1molL-1高锰酸钾标定)。
[方法]
1．酶液提取 称取新鲜小麦叶片或其他植物组织0．5g，置研钵中，加入2-3ml 4℃下预冷的磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀，将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，5℃下保存备用。
2．测定 取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表42-2顺序加入试剂。 25℃预热后,逐管加入的H2O2，每加完1管立即记时，并迅速倒入石英比杯，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按式42-3计算酶活性。
3．结果计算 以1min内A240减少0．1的酶量为1个酶活单位(u)。
过氧化氢酶的活性（）=
式中 Aso--加入煮死酶液的对照管吸光值；背板制作
As1,As2-样品管吸光值；
Vt--粗酶提取液总体积(ml);
V1--测定用粗酶液体积(ml);
FW--样品鲜重(g); 0．1-A20每下降0．1为1个酶活单位(u);
t-加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。
注意:凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
【思考题】
1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些？
2、过氧化氢酶与哪些生化过程有关
参考文献 【1】Mukherjee S P,Choudhuri M of glycoalte oxidase activety H2O2 content and catalase (58):167-170
【2】蒋明义，郭绍刚，渗透胁迫下稻苗铁催化的膜脂过氧化作用.植物生理学报.(1):6-12
【3】林植芳，李双顺等.衰老叶片和叶绿体中H2O2的积累与膜脂过氧化的关系，植物生理学报.1998,14(1):16-22
【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京：中国农业出版社，1995
内红瞄准镜
【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南，陈石根等译.酶法分析手册.上海：上海科学技术出版社，1982
过氧化氢酶
pH值范围4-9,而以,37℃最适。冷冻、冻干、阳光、氧气降酶活。用Beers&Sizers法（改 进型）测定。见[德]B 施特尔马赫著，钱嘉渊译 酶的测定方法 p186-188。
1.试剂：
恐龙模型仿真
(1)1N氢氧化钠溶液：称2g，用蒸馏水定容至50ml。
(2)磷酸盐缓冲液（）：取磷酸二氢钾，溶于75ml蒸馏水，用1N氢氧化钠溶液将pH调至，定容至100ml。
(3)底物溶液：现配。用磷酸盐缓冲液把过氧化氢（30％的H2O2）稀释至100ml。
(4)酶液浓度应为5-20u/ml。
2.操作：
用移液管将底物溶液和蒸馏水滴入一只1厘米比皿，并调水温至25℃。为检查在不加酶的情况下吸光度是否也降低，在240nm处以蒸馏水为参比测定吸光度，若吸光度的降低幅度超过，则在计算主值时须减去此值。取另一比皿，加入上述溶液，并加酶溶液，在240nm处以蒸馏水为参比在连续5分钟内测定吸光度（每隔1分钟读取一次结果，直至每分钟吸光度的降低值达到稳定为止）。
3.计算：在上述条件下，每分钟酶促分解1umol过氧化氢的酶量定为1个酶活力单位。
U/mg = E240×3 / ×Ew
式中：E240—240nm处每分钟内吸光度的降低值
Ew—每所用酶液中含酶的重量（mg）
—240nm处1umol过氧化氢的吸光度
3—反应混合液的总体积。
5] 波钦诺克 X H 著.植物生物化学分析方法.荆家海，丁钏荣译.北京:科学出版社，～207
参考文献
【1】Mukherjee S P,Choudhuri M of glycoalte oxidase activety H2O2 content and catalase (58):167-170
【2】蒋明义，郭绍刚，渗透胁迫下稻苗铁催化的膜脂过氧化作用.植物生理学报.(1):6-12
【3】林植芳，李双顺等.衰老叶片和叶绿体中H2O2的积累与膜脂过氧化的关系，植物生理
学报.1998,14(1):16-22
【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京：中国农业出版社，1995
【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南，陈石根等译.酶法分析手册.上海：上海科学技术出版社，1982
实验13 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理
过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：小麦叶片
（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. mol/L 磷酸缓冲液；3. L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR），用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用L 草酸溶液标定；4. L H2O2市售30%H2O2大约等于L，取30%H2O2溶液，稀释至1000ml，用标准L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. L 草酸：称取优级纯 ，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
