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篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。 一、过氧化氢含量的测定
【原理】
h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比测定。在一定范围内，其颜深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】
研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】
100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。【方法】
1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。 待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表3 5-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比。3.结果计算：
植物组织中h2o2含量(μmol/gFw)=
式中c—标准曲线上查得样品中h2o2浓度（μmol）；Vt—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；Fw—植物组织鲜重（g）。
二、过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法
【原理】
过氧化氢酶（cAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
刮膜棒 R(Fe+2)+h2o2==R(Fe+3+oh－)
oadm
R(Fe+3oh－)2+h2o2==R(Fe+2)2+2h2o+o2
车流量统计 据此，可根据h2o2的消耗量或o2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的h2o2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的h2o2
5h2o2+2Kmno4+4h2so4
5o2+2Khso4+8h2o+2mnso4
即可求出消耗的h2o2的量。【仪器和用具】
研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。【试剂】
10%h2so4；0.2mol/L磷酸缓冲液ph7.8；
0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取Kmno4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；
0.1mol/Lh2o2：市售30%h2o2大约等于17.6mol/L，取30%h2o2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/Kmno4溶液（在酸性条件下）进行标定；
喷射混凝土用速凝剂视频采集 0.1mol/L草酸：称取优级纯h2c2o4·2h2o12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。【方法】
1.酶液提取取小麦叶片2.5g加入ph7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
