Protocol集中营，你值得拥有！
作者：解螺旋.子非鱼
如需转载请注明来源：解螺旋·医生科研助手
·导语·
实验protocol往往是科研汪们行走江湖时必备的武林秘籍，且一份真正靠谱的protocol绝对是神兵利器。而在免疫学研究之势如火如荼的今天，其实验手段更是五花八门，让人眼花缭乱。那么现在小鱼就把免疫学上最常用的基础实验（western blot、免疫共沉淀、免疫组化及ELISA）的protocol介绍给大家。 Western blot（WB）
WB是用特异性抗体对PAGE电泳的蛋白质样品进行着，并通过分析着的位置和深度来获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。（回复关键词“WB”，可查阅WB经验大盘点的文章，关键词回复的正确姿势请点击这里） Protocol：
1 从细胞中提取蛋白，并测定蛋白浓度含量。
屋顶融雪装置
2 取适量蛋白液与loading buffer（含有SDS和β-巯基乙醇）混合，加热煮沸5min，使蛋白变性后与SDS结合携带负电。3 将变性蛋白进行SDS-PAGE胶电泳。在电压的作用下，带负电的蛋白质由上向下在凝胶里移动，且蛋白的分子质量越大，其迁移率越慢。
4 转膜：通过半干法或湿转法将PAGE胶上的蛋白转移至NC膜或PVDF膜上。
5 免疫印迹：封闭&敷抗体。
苯胺的制备
彩相纸
6 检测方法
大微动开关
免疫共沉淀
蚀刻液再生
消音降噪免疫共沉淀是利用抗原和抗体的特异性结合及细菌的Protein A或G特异性结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象，将靶蛋白从混合体系中沉淀下来。
该实验共包括了3种类型：IP（如染体免疫共沉淀CHIP）、Co-IP和Pulldown
IP是只利用抗体抗原的特异性结合即可将靶蛋白从混合体系中沉淀下来。其中，CHIP便是由IP技术衍生而来。（回复关键词“CHIP”,可查看相关文章，关键词回复正确姿势请点这里）
Co-IP是在细胞非变性裂解时，蛋白之间的相互作用被保留下来，如果蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。
