1. 烘⽚:60℃烘⽚0.5-2⼩时。
2. 脱蜡⽔化:烘⽚结束后,⽯蜡切⽚依次置于以下试剂中:
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抑制的生活>风力发电机叶片设计1)⼆甲苯I:30 min
2)⼆甲苯II:30 min
3)100%⼄醇:10 min
4)95%⼄醇:10 min
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5)80%⼄醇:10 min
6)70%⼄醇:10 min
7)⾃来⽔冲洗10 min
3. 抗原修复-微波炉抗原热修复法(可选):将组织切⽚转移到沸腾的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。
低⽕加热⼀分钟,停⽌加热并静置于微波炉中10min。然后再低⽕加热3-4分钟,停⽌加热,使EDTA-Tris 溶液在室温⾃然冷却。 4. PBST漂洗3次:去除残留并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM漂洗5 min,重复3次。 5. 阻断内源过氧化物酶:⽤3%-5% H2O2室温孵育10min。低压注塑成型
6. PBST漂洗3次:去除残留并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM漂洗5 min,重复3次。
7. 封闭:去除残留,⽤5%BSA室温孵育20 min。
8. 孵育⼀抗:去除残留,⽤已稀释⾄⼯作液的⼀抗4℃孵育过夜(推荐使⽤)或37℃孵育60min。电动自行车越来越受到人们的青睐
9. 复温:将切⽚从4℃移⾄室温静置约需20min。
10. PBST漂洗3次:去除残留并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM漂洗5 min,重复3次。
11. 孵育HRP标记的⼆抗:去除残留物,⽤已稀释⾄⼯作液的⼆抗4℃孵育60min。
12. PBST漂洗3次:去除残留物并浸泡在PBST中,在摇床中以40 RPM冲洗5 min,重复3次。
13. 显⾊:使⽤DBA试剂盒(Cat # IS046)进⾏组织切⽚的显⾊。按照说明书混合试剂A和B,在切⽚上滴加适量新鲜配制的DBA溶液,室温孵育0.5~10min,直到出现棕⾊,⽤蒸馏⽔终⽌显⾊并清洗切⽚。
14. 苏⽊精复染,然后将组织切⽚晾⼲,滴上树脂,⽤盖玻⽚盖住组织部分,在显微镜下观察。