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一、 实验原理和目的
H2O2在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性
多功能开瓶器二、 实验器具和步骤
材料：海桐叶
仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml 刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；
试剂:0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0 、pH7.8 0.1mol/L H2O2
步骤： 1．称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000r／min 离心15分钟，倾出上清液。
2.测定：取10ml试管2支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。
紫外吸收法测定H2O轴流式压气机2样品液配置表 淀粉牙签
管 号 | S1 | S2(对照) |
粗酶液(ml) | 0.2 | 平行流冷凝器0.2（ph7.8 PBS） |
pH7.8磷酸(ml) | 1.5 | 1.5 |
蒸馏水(ml) | 1.0 | 1.0 毛刷制作 |
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3．测定: 25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。
4.按下式计算酶活性。
结果计算：
以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。
过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= ΔA240* Vt/(0.1* t* FW *V1 )
Vt—粗酶提取液总体积（ml）；
V1—测定用粗酶液体积（ml）；高温闸板阀
FW—样品鲜重（g）；
0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
三、 实验数据和作业
过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10
四、 数据分析
过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。
五、 思考题
（1） 影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?
答：叶片的选择，温度的变化，研磨是否充分，洗涤是否干净。
（2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?
答：过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物,它能够对机体造成损害.为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质.
过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中,它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2,使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH.
