附件 2
一、目的
（三）病毒分型和溯源。
（四）为登革热流行趋势的预测、 预警和制定防治对策、 措施提供科学依据。
二、检测对象
（一）疑似和临床诊断病例（按照登革热诊断标准 WS216-2008）。
（二）伊蚊成蚊和幼虫。
用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血，及时分离血清，分装 2 份，保存于 带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内， 标记清楚后低温保存， 其中 单宁酶1 份用于现场实验 室检测， 金银卡纸1 份用于上级预防控制机构复核（附件 1，附表 1）。
1.登革热临床诊断病例及疑似病例，每次采集血液标本 抛光磨头5mL 。
2.登革热临床诊断和疑似的住院病例（包括初筛阴性），应采集双份血液标 本，入院当天和出院前 1 天各一份。
3.疫点首发病例，必要时应采集第二份血标本，距第一份血样采集日期间隔 在 7 天以上。
（二）蚊媒标本采集
疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫， 分类鉴定后， 填写媒介标本采集信息表， 按 照采集地点分装，每管 10-20 只。
（三）标本保存、运送
标本应-70C以下保存，血液标本可-20C以下保存，但不超过1周。 标本运送时采用低温冷藏运输， 避免冻融，样本运输应遵守国家相关生物安 全规定。
四、检测内容
（一）实验室检测 登革热疑似病例发生所在地医院和 /或县（市）疾控机构采集病例血清，检 测登革病毒抗原、核酸或抗体，检测流程参见图 1 。
（二）复核检测
1.送市或省级疾病预防控制机构的临床标本，抽样 30%进行复核检测，疫点 首发病例需采用病原学和 /或双份标本血清学方法复核检测，暴发疫情复核检测 不少于 5 例，疫情少于 5 例者应全部检测，病毒核酸阳性标本应分型检测。
2.疫点首发病例，重症病例、输入病例急性期标本应采用 PCR 方法进行分
型检测，阳性者分离病毒，从临床标本或所分离病毒中扩增 E 蛋白编码基因， 完成序列分析。
3.每次暴发疫情应开展病毒全基因组序列分析。
4.实验室检测阴性临床病例以及重症病例，应对恢复期血清进行 IgM 、IgG
抗体和 升频/或中和抗体检测。
（三）媒介标本检测
1.核酸检测 捕获的伊蚊成蚊或幼虫，进行核酸分型检测，并扩增病毒 E 蛋白编码基因，
完成序列分析。
2.病毒分离 病毒核酸阳性的标本由国家、 省或有条件的市级疾病预防控制机构进行病毒
分离、基因组序列分析
抗体检测
登革热麺似病例
确诊
登革热
釆集第2悄标本
排除
登革热
编制报告，录入病例诊断结果
审批检测报告
发送检测报告，样本保存与运送
图1登革热疑似病例实验室检测流程
五、实验室检测方法
（一）临床标本检测
1、病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本。
（1）抗原检测：一般发病后6天内血液标本NS1抗原检出率高。标本中检 出NS1抗原可以确诊病毒感染，适用于现场快速检测，可用于早期诊断（附件2,
（2）核酸检测：一般发病后 6 天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血 清中检出病毒核酸， 可确诊而且能够分型， 可用于早期诊断， 但核酸检测容易因 污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作（附件 4）。
（3）病毒分离：一般发病后 5 天内血液标本病毒分离率较高。将标本接种 于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养（附件5）, 出现病变以后，用检测抗原或核酸的方法鉴定病毒。分离到登革病毒可以确诊， 但其耗时长，不适于快速诊断。
2.血清学检测
血清学特异性抗体检测主要适用于发病 5 天以后血液样本， 但需注意可能与 其他黄病毒感染发生交叉反应。
（ 1 ）血清特异性 IgM 抗体：采用 ELISA 、免疫层析等方法检测。 IgM 抗体 阳性，提示患者可能新近感染登革病毒， 适用于登革热早期诊断， 但单份标本不 能确诊（附件 6）。
（2）血清特异性 IgG 抗体：采用 ELISA 、免疫荧光（ IFA） 、免疫层析等 方法检测。患者恢复期血清 IgG 抗体阳转或滴度较急性期呈 4 倍及以上升高可 以确诊（附件 7， 纸巾筒8）。
