焦作市中医院药剂科…河南……焦作……454002；2.江西中方法：以初黏力、持黏性、剥离强度、感官评价为指标，通过流变仪测定不同载药量凝胶贴膏剂的复数模量与复数扩散池对贴膏剂经皮渗透性研究进行质量评价。结果：筛选所得凝、甘羟铝0.7…g 、柠檬酸1.5…g 、羧甲基纤维素钠0.9…g 、NP700…4…g 。结论：优选的凝胶贴膏剂处方及制备工艺可行，膏均匀性、渗透性良好，可为临床制剂开发奠定基础。基金项目：江西省自然科学基金项目（20202BAB206081）。 通信作者：管咏梅，博士，教授，硕士生导师。E-mail ：******************。
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（收稿日期：2020-04-23）编辑：翟兴英
骨关节疼痛是由局部关节软骨劳损和周围关节滑膜持续性炎症引起的，与饮食、生活环境等密切相关。中医认为，常见的关节炎、痛风、肩周炎等各类原因引起的骨关节疼痛均可归属于“痹证”范畴［1］。中医在“痹证”的上早有先例。在《金匮要略》就出现了对关节疼痛的论述，认为引起关节疼痛的主要病机病因是风寒湿邪侵袭机体，主要治法为祛风、除寒、除湿［2］。中药复方对骨关节疼痛尤其是慢性疼痛具有独特的疗效，如汤剂乌头汤、半夏泻心汤［3］，中成药制剂东乐膏［4］等，而中药外用能使药物在特定部位透过皮肤直达关节部位，有利于提高局部药物浓度，与口服给药比较，外用制剂更安全、能更好的保证疗效。
藏药骨关节止痛方为中医临床基本理论为指导临床常用方，由唐古特乌头、川芎、乳香、没药等组成，具有活血散结、止痛消肿作用，临床常现用现配，存在极易污染衣物、使用不便、剂量不准确、黏附力差、疗效不稳定等问题。凝胶贴膏剂是以水溶性高分子材料为骨架材料，与中药或其提取物混匀后涂布于背衬材料上制备而成［5-6］。该剂型不但可以控制药物进入体内的速率，维持平稳的血药浓度，起到长效、缓释作用，还可以降低处方中乌头的毒副作用，还可以直达患处发挥药效，提高角质层水化作用有利于药物透皮吸收等作用［7］。为此，本研
究拟将止痛方制备成凝胶贴膏剂，以期为临床提供给药剂量准确、安全有效、临床顺应性好的制剂。1…仪器与试药
1.1…仪器…CZY-G初黏性测试仪（济南兰光机电技术有限公司）；CZY-6S持粘性测试仪（济南兰光机电技术有限公司）；BLD-200N电子剥离试验机（济南兰光机电技术有限公司）；Anton Paar MCR101流变仪（Anton Paar公司）；搅拌器（德国IKA EUROSTAR digital仪器公司）；Anton Paar MCR101流变仪（Anton Paar公司）；搅拌器（德国IKA EUROSTAR digital仪器公司）；安捷伦7890A GC（Agilent，美国）；Sartorius BS124S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。 1.2…试药…Viscomate NP-700（由国际特品ISP上海分公司提供）；甘羟铝（批号：SG-0344，日本协和化学有限公司）；甘油（陕西太白山制药有限公司）；柠檬酸、无水乙醇（西陇化工股份有限公司）；CMC-Na（上海山浦化工有限公司）；PEG400（西陇化工股份有限公司）；甘羟铝（批号：SG-0344，日本协和化学有限公司）；聚氧乙烯氢化蓖麻油40（德国BASF公司；肉豆蔻酸异丙酯（中国医药
2.3…评价方法［8-10］…凝胶膏剂的质量评价多采用初黏力、持黏力、剥离强度和感官评价作为评价指标。本实验以理化指标初黏力、持黏力、剥离强度为主要指标，五项评定标准最后得分总和为总分进行比较确定最佳参数。
2.3.1…初黏力试验…按照2020版《中国药典》(四部)通过初黏性测试仪进行评价，使用不同大小钢球
从15°高的铺有凝胶贴膏剂的斜板上表面滚过，鉴定初粘力的性能需将最大钢球能否粘住作为标准。以基质粘住的最大号钢球为20分，小一号球的则减1分，按此计分方式计算得分。
2.3.2…持黏性试验…取一片凝胶贴膏剂，将具有黏性的一面膏体粘贴在试验不锈钢板表层，沿着凝胶贴膏剂长度的方向，将要求质量的砝码挂在钢板的一端上，读取凝胶贴膏剂滑移直到掉落在底部所需要的时间并且记录。以记录到最长时间为20分，其它则按比例评分。
2.3.3…剥离强度试验…取凝胶贴膏剂1片，用具有粘性的胶条将背衬固定在试验板上，将无纺布两端上、下固定在仪器上，以（300±10）mm/min速度进行实验，读取并记录剥离强度（N）。把测定的
酸1.5~2.0 g，甘羟铝0.1~0.5 g。
表1…单因素筛选结果…
辅料种类 用量/g综合评分/分
Viscomate NP-7001.075 3.095 5.070 7.070
甘油10.075 15.060 20.090 25.075
CMC-Na 0.565
1.075
1.565
2.055
柠檬酸0.568
1.050
1.575
2.080
甘羟铝0.195
0.390
0.580
0.770
2.5…Box-Behnken试验
2.5.1 考察因素与水平经考察发现Viscomate NP-
700、甘油以及CMC-Na对基质有着较大影响。考察
水平详细见表2。
表2…试验因素与编码
编码NP-700（A）/g甘油（B）/g CMC-Na（C）/g
九阴真经斩虎刀鞘-12150.5
0320 1.0
1425 1.5
2.5.2 Box-Behnken中心组合优化通过Design-
Expert软件安排试验（见表3），制备凝胶基质，对
其进行初、持黏性、剥离强度、赋形性测定和综合
感官评分，五项评定标准最后得分总和为总分，采
用Design-Expert 8.0.6软件进行回归分析，优化出
最佳基质配方。
表3…Box-Behnken中心组合试验方案与结果
试验号A/g B/g C/g总分
1 4.0200.592.06
2 4.025 1.083.49
3 4.015 1.062.33
4 3.02
5 1.559.56
5 3.0150.555.00
6 3.020 1.094.00
7 2.020 1.582.00
8 2.0200.588.42
9 3.0250.573.00
10 3.015 1.565.00
11 4.020 1.587.32
12 3.020 1.089.00
13 2.025 1.076.96
14 2.015 1.070.00
15 3.020 1.091.00
2.5.3 数据处理根据实验结果，应用Design-
Expert8.0软件进行二次多项式逐步回归拟合，得到
模型为：
Y=-269.74-32.577 5A+35.189 67B+96.463 33C
+0.71AB+0.84AC-2.344BC+3.085 83A2-0.489 7B2-
27.876 67C2，模型各项方差结果见表4，试验模
型拥有显著性（P<0.05）。B对基质影响明显
（P<0.01）；模型BC的P值小于0.05，说明B、C
软膜布间有着互相关联的作用。R=0.986 5，说明该模型可
spank站点集合营
以准确对响应值改变进行拟合，且拟合度良好。能
够用此模型来探究和推测处方结果，各因素的互相
关联结果见图1。
表4…回归模型各项方差分析
方差来源平方和自由度均方F P 模型 2 295.759255.0820.200.002 0**A 7.6417.640.610.471 7B 206.861206.8616.380.009 8**C 26.64126.64 2.110.206 0AB 50.41150.41 3.990.102 2AC 0.7110.710.0560.822 5BC 137.361137.3610.880.021 5*A 235.16135.16 2.780.156 0B 2 1 663.261 1 663.26131.73<0.000 1***C 2179.331179.3314.200.013 0*残差63.13512.63失拟项50.47316.82 2.66
0.285 3
纯差12.67
2
6.33
总和
2 358.88
14
注：***P <0.0001，差异极显著；**P <0.01，差异高度显著；*
P <0.05，差异显著。
A线性驱动器
B
C
图1…AB(A)、AC(B)、BC(C)对基质影响的预测效应面图
2.5.4 优化处方验证 各条件因素的交互作用和对得分的影响，均可以通过回归方程直接客观地表示出来，其中拟合曲面的最大值就是凝胶贴膏剂基质最佳处方，为NP-700
3.97 g、CMC-Na 0.9 g、甘油21.68 g。考虑到实际操作，将理论值修正为：甘油22 g、水65 g、无水乙醇35 g、PEG400 4 g、甘羟铝0.7 g、柠檬酸1.5 g、羧甲基纤维素钠0.9 g、NP700 4 g。按上述处方制备3批样品，该处方的凝胶贴膏剂膏体表面光滑无气泡，黏附力各方面良好，没有膜残留，均匀性等其他属性均相对优秀，表明该模型建立的方程可靠。2.6…凝胶贴膏剂的成型研究
2.6.1 提取液与处方辅料的添加顺序 凝胶贴膏剂
空白基质
载生药量 65g 载生药量 75g 载生药量 85g
0.11
10100%1,000
1010图2…不同载药量凝胶贴膏剂的复数模量变化图
空白基质
载生药量 65g 载生药量 75g 载生药量 85g
1010100
Pa*s
0.01
0.1
1
10100Pa 1,000
图3…不同载药量凝胶贴膏剂的复数粘度变化图
，
…………………………………………………………………A………………………………………………………………………………………………………………………………………B
C
A.对照品溶液；
B.24 h接受液；
C.
内酯）
图4…典型谱图
3.1.4 线性关系考察按“3.1.2”项下方法制备混合对照品溶液，分别进样20，15，10，6，3，1 µL，按本文已建立的谱条件进行HPLC分析，求得阿魏酸、藁本内酯的线性方程，结果见表4。
表4…线性关系
成分线性方程r线性范围/ng 阿魏酸Y =3 402.8 X-0.705 70.999 9 7.68~153.60
藁本内酯Y =170.68 X+0.083 50.999 7 8.92~178.32 3.1.5 精密度考察取同一对照品溶液，连续进样6次，结果阿魏酸、藁本内酯峰面积的RSD值分别为0.143 %、1.178 %，结果表明该谱仪具有良好的精密度。
3.1.6 稳定性试验取同一接受液分别于0、4、8、12、24 h进样，计算阿魏酸的峰面积RSD值为0.81 %，藁本内酯的RSD值为1.59 %，说明接受液在24 h内稳定。
3.1.7 回收率实验取已知含量的24 h接受液1 mL，精密加入对照品溶液1 mL，涡旋混合，取适量注入谱仪，结果显示阿魏酸的平均回收率为93.8 %，RSD值为2.149 %，藁本内酯的平均回收率为97.4 %，RSD值为6.37 %，说明该方法符合要求。
3.2…离体小鼠皮肤的制备和处理…取适宜小鼠，将其腹部毛剪净，后脱颈椎处死，用眼科剪将小鼠背部皮肤分离，并将其于干净的玻璃板上平铺，便于用棉花蘸取生理盐水去除皮下脂肪和黏液组织去，后洗净，用无菌生理盐水将无破损的完整皮肤冲洗数次，直至将皮肤洗白为止，用铝箔纸包裹，于-20 ℃冰箱中保存，备用。实验前自然恢复至室温，并检查鼠皮的完整性，应保证使用的皮肤无任何破损。
3.3…体外透皮实验采用改良Franz扩散池，剪取处理好的小鼠皮肤放置于扩散池与接收池间，夹紧，往接收池中加入接受液（乙醇-生理盐水，3∶7），排气泡，使内皮层能与接受液充分完全接触，保持恒温与150 r·min-1，平衡0.5 h。准确称取适量凝胶膏体，使其完全贴于小鼠皮肤表面，更换接收液，保持转速与温度，分别于1、2、4、6、8、10、12、24 h取样1 mL(并补加等体积接受液)，再以0.22 µm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液进样，以“3.1.1”项下建立的谱条件测定接受液中阿魏酸和藁本内酯的含量，并计算单位面积累计释放量Q（μg/cm2）。实验平行6份。
3.4…透皮实验结果…药物的累积透皮量Qn的计算公式如下：
1
1
n
n i i
i
n密胺粉
VC C V
Q
A
−
=
+
=
∑
其中，A-有效扩散面积（cm2），V-接受液总体积（mL），Cn为第n次取样时接受液中药物的质量浓度（μg/mL），Ci为第i次取样时接受液中药物的质量浓度（μg/mL），Vi为取样体积（mL）；以药物的累积透过量Q（mg·cm-2）为纵坐标，时间t（h）为横坐标，并对Q-t进行模型拟合，同时对曲线中的直线部分进行线性回归，求出的直线斜率即为稳态透皮速率 Js（μg·cm-2·h-1），由结果可知，凝
胶贴膏剂中阿魏酸和藁本内酯的24 h累计透过量分别为75.56 μg/cm2、125.39 μg/cm2，渗透速率分别为3.291 μg·cm-2·h-1、5.394 μg·cm-2·h-1，从表5-6可知，该凝胶贴膏剂释药符合零级动力学拟合方程。
