感受态细胞的制备与转化高中生物学选择性必修三基因工程中对于细菌作为表达载体的受体细胞，只是简单地说“先用Ca2+处理使之成为感受态细胞”，但如何制备感受态细胞并使其转化未作详细说明。常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。所谓的感受态细胞，即指受体(或者宿主)最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。通俗的讲，就是受体细胞经过

BL21(DE3)pLysS感受态细胞集合与函数概念BL21(DE3)pLysS Chemically Competent CellBL21(DE3)pLysS感受态细胞基因型：F-omp T hsd S(r B-m B-) gal dcm(DE3)pLysS Cam rBL21(DE3)pLysS感受态细胞说明：BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表

布兰奇酵母双杂筛库protocol一．BD的构建1.构建BD质粒，并转化Y2HGOLD菌株。在SD/-Trp/Aba/X的培养基上筛选Aba 浓度。夜圣2.准备筛库用的BD质粒（>6ug，体积<10ul）二．Y2HGOLD 菌株转化国外育儿经>novellnetware1.Y2H gold菌株制作感受态制备酵母感受态（参照takara protocol）2.共转化酵母（感受态细胞600

感受态细胞的选择与使用【专题】分子克隆实验专题--（五）感受态细胞的选择与使用作者: 空谷幽风(站内联系TA)发布: 2011-04-16分子克隆实验专题--（五）感受态细胞的选择与使用常用感受态细胞的特性：TOP10，DH5α：蓝白斑筛选，高效克隆，质粒抽提JM110：甲基化酶缺陷型SURE：克隆不稳定插入片段，降低同源重组DH10B：文库构建，长片段质粒的克隆（150kp质粒转化）Stbl2：

一、目得玩3Q体会1、了解感受态细胞生理特性及制备条件,掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。2、掌握质粒DNA 转化大肠杆菌得方法,了解转化得条件与利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 得原理。二、原理(一)大肠杆菌感受态细胞制备得原理所谓感受态,就是指细菌生长过程中得某一阶段得培养物,只有某一生长阶段中得细菌才能作为转化得受体,能接受外源DNA而不将其降解得生理状态。感受态形成后,细胞生理状

电转化注意事项灿烂的宋元文化作者: global.wun(站内联系TA)发布: 2009-10-20一、制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1）为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个重复，应该可以大致推断OD值是否准确！菌液看上去浑浊，但OD值不高，很可能OD稀释倍数不够！2）O

电转化感受态细胞的制备1. 用头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷30分

毕赤酵母电击转化注意事项一、  制备感受态的菌液收集时间：1、准确测定OD值：OD在1.2～1.5之间。1） 为了准确测定OD值，建议将菌液稀释不同浓度测定（1、2、4、8、16倍稀释，看其OD值是否呈线性关系）。每个倍数做3－5个重复，应该可以大致推断OD值是否准确！菌液看上去浑浊，但OD值不高，很可能OD稀释倍数不够！2） OD值是否测准也可以这样估算：OD600为40左右时，菌体湿

1.目的基因~~~~~~产物纯化回收将带有目的条带的琼脂糖凝胶，在紫外灯下用已灭菌的刀片,延条带边际仔细切割条带(切割胶块时动作要快，在紫外灯下暴露的DNA易降解，在切胶时尽量一个一个的切，每切一次，关闭紫外灯)。 然后将其放入商品纯化柱内，进行片段纯化。（具体方法步骤按照AXYGEN纯化试剂盒说明操作）(1)计算凝胶重量，以该重量作为一个凝胶体积，加入3个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均

感受态细胞制备制备感受态常用的方法是电击法和CaCl2制备法，以下介绍CaCl2制备法：1、可以从百日维新-80℃冰柜中，取出一支冻存菌株，于事先照过紫外的超净台中，用无菌的接种环轻轻蘸取菌种后，在无抗平板（由于Rocetta含有氯霉素抗性，需要涂布在氯霉素抗性的平板，后面的都是如此）上划线，并将菌种迅速放回-80℃保存，在划线板上做好相应标记，于37℃培养过夜。2、从37℃培养过夜的新鲜平板上挑

DH10Bac感受态细胞制备方法前言：DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性。在制作感受态细胞的时候，需要加入这两种抗生素，以防止DH10Bac中的质粒父本杆粒bMON14272（卡那霉素抗性）和辅助质粒pMON7124（四环素抗性）在细胞扩增过程中丢失，提高质粒转化后的基因转座效率。实验步骤：1. 在含有50 ug /ml Kan+和10 ug/ml Tet+抗性的LB平板或无抗平

感受态种类应用DH5α实验室最常用的感受态细胞，转化效率高，可用于蓝白斑筛选TOP10  常规实验用克隆感受态细胞，生长速度快，转化效率高，可用于蓝白斑筛选JM109 提取高质量DNA的理想菌株，可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验Mach1-T1生长速度快，转化效率高！具有噬菌体抗性JM110甲基化基因dam,dcm缺失菌株，只适用于质粒的转化，一般不用于质粒构建难忘的八个字XL1

双酶切连接反应之全攻略十二五科技成就展双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了很多次,不过很快改善了实验方法,用2周重组了 14个质粒.现就自己的体会,结合丁香园战友的宝贵经验,谈一下质粒重组的一些个人经验.1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的选择非常重要,尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,

连接产物的转化1. 实验目的大肠杆菌在特殊的试剂的处理下，可以处于感受态，易于接受外源DNA。经过热激和冷冻可以增加大肠杆菌细胞膜的通透性，便于重组质粒DNA进入大肠杆菌。可以利用蓝白斑进行筛选，白斑是含有重组质粒的大肠杆菌菌落。可以通过质粒的提取和进一步的实验进行验证。通过此实验学习大肠杆菌感受态细胞的制备和转化的基本实验步骤和实验原理，知道通过转化可以鉴定连接的效率。2. 实验原理受体菌在低温

双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用